大菱鲆光谱型抗原蛋白GAPDH免疫保护机制与保护效果关键区域定位

摘要5-6

Abstract6-11

第1章 文献综述11-25

1.1 水产业养殖近况11

1.2 迟钝爱德华氏菌的探讨11-15

1.2.1 迟钝爱德华氏菌及危害11-12

1.2.2 迟钝爱德华氏菌的致病机理12-14

1.2.3 迟钝爱德华氏菌的防治14-15

1.3 保护性抗原蛋白GAPDH15-20

1.3.1 GAPDH蛋白15-16

1.3.2 GAPDH蛋白的功能16-18

1.3.3 GAPDH的免疫学探讨18-20

1.4 鱼类免疫系统20-24

1.4.1 鱼类免疫系统组成20-22

1.4.2 鱼非特异性免疫22-23

1.4.3 鱼特异性免疫23-24

1.5 课题的探讨内容及作用24-25

第2章 重组GAPDH免疫大菱鲆保护效果浅析25-46

2.1 前言25

2.2 实验材料25-30

2.2.1 实验试剂25-27

2.2.2 实验仪器27

2.2.3 菌株、质粒及培养基27-29

2.2.4 引物与软件29

2.2.5 实验动物29-30

2.3 实验策略30-38

2.3.1 重组质粒的构建30-33

2.3.2 GAPDH蛋白的表达与纯化33-35

2.3.3 Western blot35-36

2.3.4 免疫与攻毒36

2.3.5 采血36

2.3.6 ELISA检测血清中抗体效价36-37

2.3.7 血清中杀菌活力的测定37

2.3.8 GAPDH蛋白的交叉保护性浅析37-38

2.4 结果与讨论38-44

2.4.1 GAPDH重组表达质粒的构建38-39

2.4.2 GAPDH蛋白的表达与纯化39-40

2.4.3 纯化的GAPDH蛋白的特异性浅析40-41

2.4.4 GAPDH蛋白的保护力浅析41-42

2.4.5 血清中的抗体效价42-43

2.4.6 杀菌活性浅析43-44

2.4.7 GAPDH的免疫交叉保护作用44

2.5 本章小结44-46

第3章 重组GAPDH蛋白免疫大菱鲆相关免疫因子应答浅析46-55

3.1 前言46

3.2 实验材料46-47

3.2.1 实验试剂46

3.2.2 实验仪器46

3.2.3 引物与软件46-47

3.2.4 实验动物47

3.2.5 组织47

3.3 实验策略47-49

3.3.1 RNA的抽提47-48

3.3.2 cDNA的合成48

3.3.3 荧光定量PCR48-49

3.4 结果与讨论49-54

3.4.1 组织取样49

3.4.2 各免疫组织RNA抽提结果49

3.4.3 GAPDH免疫后大菱鲆肝脏的免疫应答49-52

3.4.4 GAPDH免疫后大菱鲆脾脏的免疫应答52-53

3.4.5 GAPDH免疫后大菱鲆肾脏的免疫应答53-54

3.5 本章小结54-55

第4章 抗原蛋白GAPDH免疫保护关键区段的筛选55-67

4.1 前言55

4.2 实验材料55-57

4.2.1 实验试剂55

4.2.2 实验仪器55-56

4.2.3 菌株、质粒及培养基56

4.2.4 引物与软件56

4.2.5 实验动物56-57

4.3 实验策略57-60

4.3.1 实验案例57-58

4.3.2 构建包含△gapA的重组质粒58-59

4.3.2.1 overlap PCR58-59

4.3.2.2 AgapA连接至表达载体59

4.3.3 片段GAPDH蛋白的表达与纯化59

4.3.4 斑马鱼免疫与攻毒59

4.3.5 片段GAPDH免疫保护率浅析59-60

4.4 结果与讨论60-66

4.4.1 含AgapA的重组质粒构建60-63

4.4.2 片段GAPDH蛋白的表达63-64

4.4.3 片段GAPDH免疫保护率浅析64-66

4.5 本章小结66-67

第5章 结论与展望67-68

5.1 结论67

5.2 展望67-68