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摘要：目的:脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV），是由多种疾病引起的病理性脉络膜新生血管侵入视网膜色素上皮（RPE）下和/或上增殖形成的纤维血管膜，是国内外致盲的主要因素之一。目前对于CNV的治疗策略很多，但由于其费用昂贵、疗效不确切、安全性欠佳，由此CNV的探讨成为目前困扰眼科界的难题之一。塞来昔布（celecoxib）是一种常见的非甾体类消炎药，高度选择性抑制环氧化酶-2（COX-2），很多探讨证实其具有抑制CNV的作用。目前探讨显示信号转导与转录激活因子3（signal transducer andactivator of transcription3，STAT3）参与肿瘤以及多种眼部新生血管相关疾病的进展历程。本探讨通过观察STAT3在激光诱导的棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠脉络膜新生血管（CNV）模型中的表达规律以及塞来昔布对实验性BN大鼠脉络膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表达的影响，以而探讨CNV的发病机制和塞来昔布抑制CNV的作用机制。策略：1实验性大鼠脉络膜新生血管模型建立1.110只健康雄性棕色挪威（Brown Norway，BN）大鼠（每只大鼠右眼为实验眼，左眼为对照眼），氪激光(波长647nm,功率360mW,光斑直径50μm,时间0.05s)距离视盘2-3个视盘直径在视网膜血管之间均匀光凝9个点,以见到光凝斑有气泡产生为准提示Bruch’s膜被击穿，建立大鼠CNV模型。1.2于光凝后第1d、3d、7d、14d、21d行荧光素眼底血管造影(fluoresceinfundus angiography，FFA)。1.3造影后6h待大鼠体内荧光素大部分被排出后，处死大鼠，摘出眼球，制作眼杯石蜡包埋并切片。选取有明确血管化的激光斑连续切片中“最大CNV膜”切片，常规HE染色，并计算CNV膜相对厚度。1.4对实验结果采取SPSS13.0行卡方检验、非参数检验等统计浅析。2实验性脉络膜新生血管中STAT3的表达2.1健康雄性棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠12只，随机分为激光光凝后1d、3d、7d、14d四组，各组3只，激光光凝建立CNV模型，策略同前。2.2RT-PCR检测STAT3mRNA各时间点的表达情况。2.3免疫组化取第一部分“最大CNV膜”切片检测激光光凝后1d、3d、7d、14d磷酸化STAT3的表达情况。采取CMIS-2011细胞医学图像浅析系统测定其染色的平均灰度值，以未受激光光凝眼的组织切片做对照。2.4对实验结果采取SPSS13.0行方差浅析、t检验、正态性检验等统计浅析。3塞来昔布抑制实验性脉络膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表达的探讨3.1健康雄性棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠15只，随机分为空白对照组、实验对照组和塞来昔布治疗组，其中空白对照组3只，其余两组各6只。实验对照组和塞来昔布治疗组12只大鼠激光光凝建立CNV模型，策略同前。塞来昔布治疗组在激光光凝前一周经口灌胃塞来昔布50mg／kg，一天两次，直到实验结束。3.2于光凝后3d、7d、21d对实验对照组和塞来昔布治疗组大鼠分别行眼底荧光造影检查，观察各组各时间点CNV发生率。3.3造影后各组随机选取两只大鼠处死，摘取眼球。制作空白对照组球后段组织切片以及实验对照组和塞来昔布治疗组的“最大CNV膜”切片。3.4HE染色各组各时间点“最大CNV膜”切片，软件计算CNV膜相对厚度。3.5免疫组织化学策略检测各组各时间点“最大CNV膜”切片磷酸化STAT3、COX-2、VEGF的表达情况。3.6对实验结果采取SPSS13.0行卡方检验、t检验等统计浅析。结果:1实验性脉络膜新生血管模型的建立1.1光凝后7dCNV开始出现,21d CNV发生率达最高13/18，72.22%，（χ~2=118.389，P＜0.001）1.2FFA检查可见造影早期体现为强荧光斑，晚期出现与视网膜血管无关的荧光素渗漏。1.3光镜下可见CNV由脉络膜穿经破裂的Bruch’s膜向视网膜下进展，还可见到RPE细胞的迁移增生、巨噬细胞的浸润和纤维母细胞的增加等。光凝后7d早期CNV形成，其后CNV进一步增生，光凝后21d，纤维血管增生显著，CNV膜显著增厚,内皮细胞围成新生血管管腔1.4CNV相对厚度随时间的变化也有相应转变，在光凝后7d-21d逐渐增加，21d到达高峰。（χ~2=23.484，P＜0.05）2实验性脉络膜新生血管中STAT3的表达2.1RT-PCR检测表明，激光光凝后3天STAT3mRNA的表达达高峰，后逐渐下降（F=36.503，p＜0.01）。2.2免疫组化检测表明，磷酸化STAT3在激光光凝后3天表达达到高峰，后逐渐下降，其表达规律同RT-PCRmRNA的表达规律基本一致（F=111.629，P＜0.01）。3塞来昔布抑制实验性脉络膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表达的探讨3.1FFA检查显示光凝后7d、21d塞来昔布治疗组CNV发生率显著低于实验对照组（χ~2=9.036,10.92＜0.01，P＜0.01）。3.2塞来昔布治疗组CNV相对厚度显著低于实验对照组，差别具有统计学作用（t=2.730,4.962P＜0.05,P＜0.01）。3.3免疫组化结果显示，磷酸化STAT3光凝后3天表达最多，光凝后21天表达微弱;光凝后3d、7d塞来昔布治疗组P-STAT3的表达显著低于实验对照组（t=﹣7.834,﹣3.547P＜0.01，P＜0.01）光凝后21d两组之间表达无差别（t=0.101P=0.921）。COX-2与VEGF表达规律相似，随时间的进展而阳性表达增加，两者均在光凝后21天表达最多，光凝后7d，21d塞来昔布组COX-2、VEGF的表达显著低于实验对照组（t=﹣3.872，﹣10.905，﹣3.608，﹣4.284P＜0.01，＜0.01，＜0.01，＜0.01）；光凝后3d两组之间COX-2、VEGF表达无差别（t=﹣2.042，﹣1.972P=0.056,0.064）。结论:1STAT3参与了CNV的早期形成历程，这一历程可能是通过参与COX-2，VEGF的转录调控，进而推动新生血管形成而实现的。2选择性COX-2抑制剂塞来昔布能够有效抑制激光诱导的CNV的形成，可能是通过抑制STAT3信号转导通路，减少COX-2，VEGF的表达而实现的。关键词：脉络膜新生血管论文信号转导与转录激活因子3论文环氧化酶-2论文血管内皮生长因子论文塞来昔布论文
摘要5-9
ABSTRACT9-13
引言13-15
第一部分 实验性大鼠脉络膜新生血管模型建立15-28
前言15
材料与策略15-17
结果17-19
附图19-21
附表21-22
讨论22-24
小结24