表达期特异性双荧光蛋白转基因弓形虫构建站

摘要6-7

Abstract7-12

英文缩略表12-14

第一章 弓形虫病概述14-18

1.1 弓形虫病原学14

1.2 弓形虫形态14

1.3 生活史14-15

1.4 弓形虫病诊断和弓形虫感染的分子诊断15-16

1.5 转基因弓形虫探讨16-18

第二章 带有双荧光基因质粒的构建18-36

2.1 引言18

2.2 材料和策略18-31

2.2.1 材料18-19

2.2.2 主要仪器19-20

2.2.3 重组质粒 pET28a-RFP 的构建20-24

2.2.4 重组质粒 pET28a-RFP-GRA2t 的构建24-26

2.2.5 重组质粒 pET28a-SAG1p-EGFP 的构建26-27

2.2.6 重组质粒 pDMG-GRA2t-BAG1p-RFP-GRA2t 的构建27-29

2.2.7 重组质粒 pDMG-SAG1p-EGFP-GRA2t-BAG1p-RFP-GRA2t 的构建29-30

2.2.8 重组质粒全长测序30-31

2.3 实验结果31-34

2.3.1 重组质粒 pET28a-RFP-GRA2t 的鉴定31-32

2.3.2 重组质粒 pDMG-GRA2-BAG1-RFP-GRA2 的鉴定32

2.3.3 重组质粒 pDMG-SAG1-EGFP-GRA2-BAG1-RFP-GRA2 的鉴定32-33

2.3.4 重组质粒的测序鉴定33-34

2.4 讨论34-36

第三章 弓形虫转基因技术和转化子的筛选36-46

3.1 引言36

3.2 材料和策略36-42

3.2.1 材料36-37

3.2.2 HFF 细胞和弓形虫的体外培养37-38

3.2.3 弓形虫的电转化38-40

3.2.4 荧光弓形虫转化子的筛选与初步鉴定40-42

3.3 实验结果42-43

3.3.1 质粒浓度和电转化条件的确定42

3.3.2 PCR 反应检测 EGFP 和 RFP 基因结果42-43

3.3.3 经筛选后的转基因弓形虫荧光观察43

3.4 讨论43-46

第四章 转基因弓形虫的鉴定和生物学特性浅析46-69

4.1 引言46

4.2 材料与策略46-61

4.2.1 材料46-47

4.2.2 试剂配制47-52

4.2.3 BAG1 蛋白抗血清的制备52-58

4.2.4 Western 鉴定转基因弓形虫期别58-60

4.2.5 转基因弓形虫生物学特性浅析60-61

4.3 实验结果61-66

4.3.1 BAG1 基因的扩增和 pGEX-BAG1 重组质粒的鉴定61-63

4.3.2 BAG1 基因的原核表达和纯化63-64

4.3.3 Western Blot 鉴定转基因弓形虫期别64-66

4.3.4 转基因弓形虫对体外环境 pH 的敏感性验证66

4.3.5 转基因株与野生株对小鼠致死率的统计66

4.4 讨论66-69

第五章 全文结论69-70