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亮氨酸猪母源胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)基因克隆查抄袭率

收藏本文 2024-02-03 点赞:8080 浏览:24143 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:母源胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)是腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)相关丝/苏氨酸激酶家族中的一个独特成员。由于它在多物种中均有表达,在鼠科动物中,它又被称为鼠源丝/苏氨酸蛋白激酶38(MPK38)。与家族中其他成员不同,MELK并不是一个细胞能量代谢平衡与细胞分化的调节者,而是更多地参与到细胞周期调控、细胞增殖、肿瘤生成和细胞凋亡等重要的生理病理历程。MELK的组织分布具有很强的特异性,主要在上皮组织、造血干细胞、胚胎组织、未分化的肿瘤组织等具有很强分裂和自我更新能力的组织或个别细胞系中有所表达,在成体的心、肝、脑、肾等主要组织器官中不表达,或表达量极微不足以被现行的实验策略检测到。基于MELK参与细胞凋亡的重要功能,并且尚无国内外文献以猪作为探讨对象对MELK的功能和作用机制进行报道,本论文通过生物信息学的策略,利用NCBI数据库,先以人的MELK全长cDNA序列为种子序列,在猪的EST数据库中进行反复比对拼接延长,再通过与猪基因组数据库的比对验证,电子克隆得到了猪Melk基因的全长CDS。该序列长为2636bp,包括1953bp的开放阅读框,编码产物为由650个氨基酸组成的多肽。与人、牛等物种的核酸序列相似率分别为88.2%和91.1%。该基因定位于猪1号染色体上。其编码的多肽含S_TKc和KA1等功能结构域,与已知的其他物种MELK的结构相似。预测浅析其为核内蛋白。蛋白质空间结构预测与人的几乎相同,均含有一个亮氨酸拉链基序。进一步通过RT-PCR的策略进行实验验证,PCR扩增到一条约2100bp的DN段,与预期的猪Melk基因的cDN段大小相符。这些结果基本说明电子克隆的结果比较可靠,为该基因进一步的功能探讨奠定了基础。关键词:母源胚胎亮氨酸拉链激酶论文克隆论文猪论文

    摘要6-7

    ABSTRACT7-11

    文献综述11-19

    第一章 母源胚胎亮氨酸拉链激酶的探讨进展11-19

    1.1 MELK的基本特点11-12

    1.2 MELK的相关功能探讨12-17

    1.2.1 MELK参与未成熟T细胞的诱导活化和早期胚胎的造血作用及视网膜发育12

    1.2.2 MELK的表达与细胞周期和胞质分裂的联系12-13

    1.2.3 MELK的磷酸化作用与蛋白互作探讨13-14

    1.2.4 MELK与乳腺癌的发生密切相关14-15

    1.2.5 MELK参与神经祖细胞增殖并与多种脑瘤密切相关15

    1.2.6 MELK与结直肠癌对放化疗的抵抗密切相关15

    1.2.7 MELK抑制因子的发掘15-17

    1.3 MELK探讨中拟待解决的不足及其作用17-18

    1.4 本探讨的目的和作用18-19

    实验探讨19-30

    第二章 猪母源胚胎亮氨酸拉链激酶的克隆与生物信息学浅析19-30

    2.1 材料19-20

    2.1.1 猪MELK基因克隆历程中所用到的组织、载体和工程菌19

    2.1.2 猪MELK基因克隆历程中所用到试剂与限制性内切酶19

    2.1.3 猪MELK基因克隆历程中所用到的主要仪器与设备19

    2.1.4 猪MELK基因电子克隆历程中所用到的生物学软件19-20

    2.1.5 主要的数据库与在线浅析工具20

    2.2 策略20-23

    2.2.1 猪MELK基因克隆的策略20-21

    2.2.2 猪MELK基因电子克隆的实验验证21-23

    2.2.3 猪Melk基因序列结构与生物信息学浅析23

    2.3 结果与浅析23-28

    2.3.1 猪Melk基因的电子克隆结果23-25

    2.3.2 猪Melk基因的特异性RT-PCR扩增结果25

    2.3.3 不同物种间Melk基因的同源性比较25-26

    2.3.4 猪Melk基因编码蛋白的结构及组成预测26

    2.3.5 多物种MELK蛋白质氨基酸序列的系统进化联系浅析26-27

    2.3.6 猪MELK蛋白质氨基酸磷酸化位点预测27

    2.3.7 猪MELK蛋白质空间结构预测浅析27-28

    2.4 讨论28-29

    2.5 结论29-30

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