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摘要：猪传染性胸膜肺炎是一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病，最急性病例死亡率可达80-100%。该病的病原是猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)，由于该菌极易造成机体肺脏损伤，加之耐药菌株的大量出现，感染后的病猪非常难以治愈，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。APP血清型多达15个，主要血清型间缺乏交叉免疫保护，导致疫苗探讨进展十分缓慢，到目前为止国际上尚无广谱的、对多种血清型交叉保护的商品化疫苗。痤疮丙酸杆菌（Propionibacterium acnes，PA）是广泛有着于正常人或动物体表、体腔及病灶中的一种革兰氏阳性菌，在动物临床尚未见有关该菌致病的报道。因为PA对单核细胞系统有较强的激活作用，也有提升机体对各种抗原的免疫原性的佐剂效应，能够推动体内抗菌肽的表达量，提升机体抵抗细菌感染的能力，尤其具有独特的抗癌活性，因而PA菌苗或其提取物在医学临床作为一种免疫增强剂和抗肿瘤制剂的探讨和运用十分活跃。本课题组经小鼠和仔猪免疫与攻毒试验，发现痤疮丙酸杆菌（PA）可以预防猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）感染。为寻找APP各主要血清型间的交叉免疫保护基因，本课题组在2007年系统筛选APP主要血清型差别基因，却意外地发现PA与APP有着很强的交叉免疫反应。虽然已经初步证明PA对APP感染具有特异性预防作用，而且以体液免疫为主。但是尚未系统、深入探讨PA免疫应答及其保护作用的确切机制，限制了对其进一步的开发与利用。为阐明PA预防APP感染的作用机制，推动猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的探讨，本探讨分别以活菌和灭活的PA菌株免疫小鼠(BALB/c)，检测免疫应答抗体水平、抗体类型；FACS（fluorescence activated cell sorting）浅析肺细胞悬液中淋巴细胞的种类和比例；测定不同抗体水平下APP攻毒小鼠的存活情况；并综合浅析介导PA免疫应答的类型，阐明PA免疫应答抗体的种类、水平与预防小鼠APP感染效果的相关性。同时通过间接免疫荧光、抗体调理实验，确证抗体在预防APP感染中的作用；建立B细胞损耗小鼠模型，用PA免疫后攻毒，考察抗体水平低下时的抗感染能力，反向验证抗PA抗体的作用。实验表明PA活菌免疫产生的抗体水平和保护效果都显著优于灭活菌，最佳活菌免疫剂量为2~*10~8CFU。以最佳免疫条件进行免疫，APP1攻毒后的小鼠的存活率与PA免疫小鼠后的抗体水平有着极其显著的正等级相关联系，并且PA诱导产生的抗体在体外能够与APP1结合。在加入10%的抗PA高免血清时，能够显著的推动吞噬细胞对APP1的吞噬，与抗APP血清的促吞噬效果无差别，证明PA诱导的抗体能够特异性推动吞噬细胞对APP1的吞噬作用。此外，我们还成功构建了小鼠B细胞损耗模型，在此模型上用PA免疫与对照相比，抗体水平显著低下，保护率显著降低，说明PA免疫诱导的特异性B细胞及其产生的抗体在预防APP感染中起着非常重要的作用。本探讨丰富了PA菌株的用途，开创了APP预防性疫苗探讨的新局面，初步阐明了PA预防猪传染性胸膜肺炎发生的作用机制，为猪传染性胸膜肺炎的药物探讨及异源疫苗探讨提供有益的论述基础。关键词：痤疮丙酸杆菌论文胸膜肺炎放线杆菌论文抗体论文预防论文感染论文
中文摘要5-7
Abstract7-12
前言12-13
第一篇 文献综述13-24
第1章 痤疮丙酸杆菌的免疫调节作用探讨进展13-24
1.1 痤疮丙酸杆菌介绍13
1.2 PA 的生长特性13
1.3 PA 在痤疮炎症中的作用13-16
1.4 PA 的免疫调节作用16-19
1.5 PA 免疫调节作用的有效成分19-20
1.6 PA 免疫调节作用的运用20-22
1.7 PA 免疫调节探讨的新进展22-23
1.8 PA 运用探讨展望23-24
第二篇 探讨内容24-73
第1章 痤疮丙酸杆菌诱发的体液免疫应答的浅析24-39
1.1 材料策略25-29
1.2 结果29-36
1.3 讨论36-37
1.4 小结37-39
第2章 抗痤疮丙酸杆菌抗体水平与预防APP感染的动态联系39-50
2.1 材料策略40-42
2.2 结果42-47
2.3 讨论47-49
2.4 小结49-50
第3章 抗痤疮丙酸杆菌抗体调理作用体外验证50-60
3.1 材料策略51-55
3.2 结果55-57
3.3 讨论57-59
3.4 小结59-60
第4章 体液免疫应答在抗APP感染中的作用60-73
4.1 材料策略61-65
4.2 结果65-70
4.3 讨论70-72
4.4 小结72-73
结论73-74