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简谈联用基于小鼠模型药物治疗糖尿病代谢组学

收藏本文 2024-03-21 点赞:34689 浏览:158234 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:代谢组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后在科学界新进展起来的学科,通过评价组织和其他生物流体中内源代谢物的变化情况来反应疾病或者治疗情况。本论文主要针对如何有效调节糖尿病高血糖症状进行了探讨,主要分为两大探讨方向:一是采取代谢组学的策略,运用GC-MS联用技术,探讨了通过诺和龙治疗的2型糖尿病KK-ay小鼠模型的动态尿液代谢谱和生物标记物;二是运用分子印迹和固相萃取联用技术,以虎杖中分离出能改善糖尿病症状的活性成分白藜芦醇。本论文内容包括以下几个方面:一:采取常规的硅烷化衍生策略,结合GC-MS联用技术,对20只KK-ay糖尿病小鼠和5只C57BL/6J健康小鼠的尿液内源代谢物进行提取和浅析,建立了稳定的尿液代谢图谱。在尿液样本的总离子流图中,41个峰代表41种内源代谢物,结合标准物质和NIST05质谱库,完成了对小鼠的内源代谢物的定性工作,采取与相同色谱图中内标物作比的归一化峰面积策略完成了定量工作。通过对定性定量结果的比较,找出了不同小鼠模型之间的内源代谢产物的差别。二:通过浅析5种重要的内源代谢物,探究了诺和龙治疗糖尿病的相关机理,结果表明诺和龙不仅有调节血糖和多元醇的功能,还能调节生物体内的有机酸,是一种非常重要的膳食血糖调节剂。三:以白藜芦醇为模板分子,4-乙烯基吡啶(4-VP)为功能单体,二乙烯基苯(DVB)为交联剂,采取本体聚合法,合成了白藜芦醇分子印迹聚合物(MIP)。探讨了聚合物的粒径分布,吸附性能和识别性能。结果表明,MIP形状规则,分散良好;在聚合物中形成了2类不同的结合位点,经计算其离解常数分别为:Kd1=1.09×103mol/L;Kd2=2.17×103mol/L。MIP对模板分子和比较底物白藜芦醇苷和大黄素体现出较好的选择性能。固相萃取实验表明,该MIP适用于对虎杖中白藜芦醇的分离。关键词:2型糖尿病论文代谢组学论文气质联用论文KK-ay小鼠论文诺和龙论文分子印迹技术论文虎杖论文白藜芦醇论文

    摘要4-5

    ABSTRACT5-7

    目录7-9

    第一章 绪论9-21

    1.1 糖尿病的特点及分类9-10

    1.2 诺和龙介绍10-11

    1.3 代谢组学的运用11-14

    1.4 白藜芦醇与糖尿病治疗14-16

    1.4.1 白藜芦醇的胰岛素增敏作用15

    1.4.2 白藜芦醇的抗氧化应激作用15-16

    1.4.3 白藜芦醇对糖尿病的的其他疗效16

    1.5 中药中活性成分的分离和纯化16-19

    1.5.1 中药有效成分的提取策略16-17

    1.5.2 中药有效成分的纯化策略17-19

    1.6 文章主要内容及探讨目的19-21

    第二章 模型小鼠尿液内源代谢物浅析策略的建立21-30

    2.1 引言21-22

    2.2 试剂与仪器22-23

    2.2.1 主要试剂22

    2.2.2 主要仪器22-23

    2.2.3 主要试剂配制方式23

    2.3 试验动物及尿液样本23

    2.4 实验部分23-24

    2.4.1 小鼠尿液内源性物质的衍生及提取23-24

    2.4.2 GC/MS浅析24

    2.5 结果与讨论24-29

    2.5.1 尿液代谢组学的重要量24-25

    2.5.2 尿液样本的提取及衍生条件的优化25

    2.5.3 GC/MS条件的优化及确定25-26

    2.5.4 实验小鼠尿液代谢图谱的建立26-29

    2.6 本章小结29-30

    第三章 代谢谱的定性定量及重要代谢物与糖尿病的关联浅析30-39

    3.1 引言30

    3.2 论述部分30-31

    3.2.1 自标度化(autoscapng)30-31

    3.2.2 主成分浅析(Principal Component Analysis,PCA)31

    3.3 数据浅析31

    3.4 结果与讨论31-38

    3.4.1 41种内源代谢物的定性定量31-35

    3.4.2 小鼠样本经诺和龙治疗后的代谢足迹变化35-36

    3.4.3 生物标记物对代谢足迹变化的贡献36-38

    3.5 本章小结38-39

    第四章 分子印迹固相萃取技术在虎杖提取物活性成分分离中的运用39-47

    4.1 引言39

    4.2 实验部分39-41

    4.2.1 仪器和试剂39-40

    4.2.2 分子印迹聚合物的制备40

    4.2.3 吸附性能测定40

    4.2.4 识别性能测定40

    4.2.5 虎杖提取物的制备40

    4.2.6 固相萃取柱的制备和虎杖提取液的分离40-41

    4.3 结果与讨论41-45

    4.3.1 聚合原料的选择41-42

    4.3.2 静态吸附试验42-43

    4.3.3 印迹聚合物结合底物的选择性43-44

    4.3.4 MIP固相萃取柱对虎杖提取液中Res的分离44-45

    4.4 本章小结45-47

    第五章 总结47-48

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