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摘要：目的：自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的发病与诱发因素、自身抗原应答、遗传易感性和免疫调节网络等相关。单用糖皮质激素或联合免疫抑制剂有着疾病完全缓解率低,需要长期服药和类肾上腺皮质功能亢进综合症等多种副作用。AIH最终可进展为肝硬化并需要肝移植,寻找更安全、有效和经济的治疗策略将有深远的作用。对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的理化特性和实际运用的探讨为AIH的治疗提供了新的方向。MSCs具有免疫抑制、多向分化和抗纤维化等多方面的作用。本探讨探讨MSCs对AIH小鼠模型的治疗作用及其可能的机制,并观察MSCs预移植对AIH小鼠成模的影响。材料和策略：1.AIH小鼠动物模型的建立。分次腹腔注射同种异体小鼠肝s-100抗原与弗氏完全佐剂乳化液,首次注射后第4周予以鉴定模型是否建立。2.MSCs移植对AIH小鼠模型疗效观察。AIH小鼠随机分为三组：MSCs移植治疗组(组1),给予1×106/只MSCs单次尾静脉注射；地塞米松治疗组(组2),给予0.25mg/g·周DXM分次腹腔注射；空白对照组(组3),给予0.05ml/只·周PBS腹腔注射；实验第5周和第9周取肝脏制作病理切片,取血清测谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)水平3.观察MSCs对AIH成模的影响。分为两组：首日MSCs移植,隔日给予造模处理(组Ⅰ)；首日给予磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)注射,隔日造模处理(组Ⅱ)。首次注射后4周取肝脏做病理检查,取血清标本测ALT。4.体外MSCs上清液对脾淋巴细胞增殖的影响：凝胶层析技术分离小鼠肝s-100抗原第1峰(s-100-1),用小鼠淋巴细胞分离液分离出正常小鼠的脾脏淋巴细胞,进行分组：刀豆蛋白A培养组(组A)；刀豆蛋白A联合MSCs上清液培养组(组B)；s-100-1培养组(组C)；s-100-1联合MSCs上清液培养组(组D)。对各组进行淋巴细胞增殖抑制实验,后测各组吸光度(optical density,OD)值。结果：1.AIH小鼠模型的建立：AIH小鼠肝脏平均炎症评分为2.67±0.516, Knodell评分5.50±1.975,血清学AIL水平为122.00+15.476。2. MSCs移植于AIH小鼠的疗效观察：2.1造模后(第4周)小鼠血清ALT为122.00±15.476U/L。第5周,组1、组2和组3小鼠血清ALT分别为：101.43±9.144U/L、115.00±10.315U/L和118.33±15.161U/L。三组间差别有统计学(P0.05),组1和组2两组间比较,差别无统计学作用(P0.05)。第9周,组1、组2和组3小鼠血清ALT分别为：84.00±6.557U/L、98.83+15.767U/L和107.50±11.777U/L,三组间差别有统计学作用(P0.05),组1和组2两组间比较,差别有统计学作用(P0.05)。2.2造模后(第4周)小鼠肝脏Knodell评分为5.50±1.975。第5周,组1、组2和组3小鼠肝脏Knodell评分分别为：3.00±1.528、3.33±1.366和4.67±1.862,三组间差别无统计学作用(P0.05),组1和组2差别无统计学作用(P0.05)。第9周,组1、组2和组3小鼠肝脏Knodell评分分别为：2.00±1.291、2.67±0.516和4.33±2.066,三组间差别有统计学作用(P0.05),组1和组2差别无统计学作用(P0.05)。3. MSCs预移植对小鼠AIH模型成模的探讨：3.1组Ⅰ和组Ⅱ小鼠的ALT水平分别为：52.17±15.741U/L和122.±15.476U/L,差别有统计学作用(P0.05)。3.2组Ⅰ和组Ⅱ小鼠的肝脏Knodell评分分别为：3.33±0.816和5.50±1.975,差别有统计学作用(P0.05)。4.体外MSCs上清液对脾淋巴细胞增殖的影响：组A的OD值为0.267±0.167,组B的OD值为0.217±0.128,两组间差别有统计学作用(P0.05)。组C的OD值为0.165±0.187,组D的OD值为0.082±0.051,差别有统计学作用(P0.05)。结论：1.同种异体肝抗原与弗氏完全佐剂乳化液注射策略可以复制出AIH小鼠模型。2. MSCs移植可以减低AIH小鼠血清ALT水平和肝脏炎细胞浸润,提示MSCs移植对AIH小鼠具有治疗作用。3. MSCs预移植也可以显著降低AIH小鼠ALT水平和肝脏炎细胞浸润情况。提MSCs预移植可以预防AIH小鼠的发病。4.体外MSCs上清液可以显著抑制抗原物质引起的T淋巴细胞增殖作用,这一作用可能是MSCs对AIH小鼠发挥治疗作用的机制。关键词：骨髓间充质干细胞论文自身免疫性肝炎论文动物模型论文细胞移植论文免疫抑制论文
中文摘要4-6
Abstract6-10
符号说明10-11
前言11-14
探讨近况、成果11-13
探讨目的、策略13-14
材料和策略14-23
结果23-31
讨论31-39
结论39
本探讨革新性自我评价39-40