常规HPLC法检验中药常见问题

[摘要] 目的 探讨常规高效液相色谱（Hplc）法（ODS柱，紫外检测器）检验中药中遇到的常见问题。 方法 结合笔者近几年检验工作的实践和经验来展开分析讨论。 结果 提出了解决常见问题的方法和对策。 结论 具体问题要具体分析，合理调整可变的检验条件是解决问题的重要途径。
[关键词] 中药；HPLC；药品检验
[] C[文章编号] 1673-7210（2012）08（c）-0152-02
Discussion on common problems in traditional Chinese medicine inspection with conventional HPLC method
LI Jinping
Institute for Food and Drug Control in Panzhihua City, Sichuan Province, Panzhihua 617000, China
[Abstract] Objective To discusse the common problems encountered during traditional Chinese medicine inspection with conventional High Performance Liquid Chromatography method(ODS column, ultriolet detector). Methods These problems were analyzed with years of practices and experiences of the author in drug inspection. Results Methods and countermeasures were put forward to dissolve these common problems. Conclusion With the problems tackled case-by-case, reasonable adjustment of variable inspection conditions is an important way for problem solving.
[Key words] Traditional Chinese medicine; HPLC; Drug inspection
高效液相色谱（HPLC）法是一种同时具有分离、分析功能和快速、高效、灵敏等优点的检测技术，现已成为药品分离、鉴定和含量测定的首选方法。运用HPLC法进行中药检验时，最常规的检测条件是十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）为填充剂的色谱柱和紫外检测器。在《中国药典》一部中，很多品种也都采用了常

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规HPLC法来检验。笔者就自己在运用该法检验中药时遇到的几个常见问题，结合工作实践，谈谈自己的看法，希望能对中药检验工作者，特别是接触检验工作不久的人员提供参考和帮助，以便在遇到类似问题时，容易找到解决的思路和方向，使问题能及时准确地处理，也为检验工作的顺利推进起到积极作用。

1 对照品峰被分成2个的问题

常规HPLC法检验中药中，单一的对照品应该只出1个峰，但有时会出现对照品峰被分成2个的情况，如果遇到这样的问题，笔者认为，不要急于更换色谱柱或调整流动相，可以先考虑减少进样量再进1针，有可能是样量过载。比如笔者在做刺五加片[3]489（多多药业有限公司，批号：1005091）的含量测定时，设定的检验条件：Kromasil 100-5 C18柱，柱温35℃，流动相各组分比例与标准相同，流速0.95 mL/min，进样10 μL，对照品紫丁香苷峰被分成2个，小峰在左侧。在其他条件不变的情况下，将进样量改进5 μL，则峰型正常；在做九味羌活颗粒[4]449（九寨沟天然药业集团有限责任公司，批号：110302）的含量测定时，设定检验条件Kromasil 100-5 C18柱，柱温35℃，流动相各组分比例与标准相同，流速1.00 mL/min，进样20 μL，对照品黄芩苷峰被分成2个，小峰在左侧，同样只将进样量改为10 μL，则峰型正常。如果减少进样量仍不能解决，再考虑更换其他品牌的色谱柱，如果没有多余色谱柱，则可试做其他品种，观察其他对照品是否出现类似情况。笔者多年的实践发现，色谱柱使用多年后或损坏时，会将对照品峰分成2个，小峰多在右侧。这时可以采取有把握的反冲色谱柱或不同极性有机溶剂长时缓冲色谱柱，尽可能使色谱柱再生。

2 理论板数不能满足要求

在《中国药典》2010年版一部中，理论板数是色谱系统适应性的重要指标，明确规定了其下限。检验时有时候会出现理论板数低于下限值。这时先观察理论板数的实际值与规定最小值相差多少，如果不是太大，可通过减少进样量来有效提高理论板数，减少进样量也就减小了半峰宽，根据理论板数的计算公式知当保留时间不变的情况下，半峰宽减小，理论板数增大。如果相差较大，减少进样量也不能满足要求，再考虑更换色谱柱、调整流动相、柱温。

3 分离度不能满足要求

在《中国药典》2010年版一部中，分离度也是色谱系统适应性的一个指标，检验时有时会出现两个物质不能有效分离，如果遇这种情况，笔者认为可以考虑更换色谱柱，这样既简捷也比较有效。不同品牌、规格的色谱柱有各自的特点，对同一物质的洗脱分离能力各不相同。比如笔者在做生脉注射液[5]（四川省宜宾五粮液集团宜宾制药有限责任公司，批号：10082011）的含量测定时，设定的检验条件：菲罗门Luna柱，柱温35℃，流动相各组分比例与标准相同，流速1.60 mL/min，进样20 μL；人参皂苷Rg1与人参皂苷Re不能有效分离。将检验条件改为菲罗门Gemini柱，柱温40℃，其他条件不变，则分离度达到要求。或者将检验条件改为Kromasil 100-5 C18柱，其他条件不变，则分离度也能达到要求。如果没有多余的色谱柱，可以多次调整流动相的比例，通过改变流动相的极性，使被测物质峰的分离度达到要求。

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