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摘要：目的：膀胱泌尿上皮癌是泌尿系统的最常见的肿瘤而且预后不良。目前膀胱癌的治疗效果并不能令人满意。早在1977年就有学者提出了肿瘤干细胞(CSCs)的检测设。该检测设认为肿瘤组织中的肿瘤干细胞是肿瘤发生、转移及复发的根源。最近十余年时间里,已经以实验室成功分离鉴定了急性髓性白血病的肿瘤干细胞。虽然7至9种人类CSCs已被成功分离鉴定,但其余大部分CSCs还未被分离鉴定,包括膀胱癌肿瘤干细胞。分离肿瘤干细胞的常用策略有3种。第一种也是最常见的策略是利用干细胞表面标志物,运用流式细胞技术进行细胞筛选；第二种是利用普通干细胞的培养基即无血清培养基的策略分选；最后一种则利用侧群细胞(SP)具有一定干细胞特性,运用流式细胞技术分离SP细胞作为肿瘤干细胞。但是以上3中策略因为各自理由都无法成功分离膀胱癌肿瘤干细胞。最近有报道利用化疗药物在动物体内成功分选肝细胞癌肿瘤干细胞。由此,本探讨基于该探讨策略尝试利用化疗药物体外初步分选膀胱癌肿瘤干细胞,验证该策略的可行性。策略：利用丝裂霉素C按一定的浓度梯度持续24小时作用于膀胱泌尿上皮癌T24细胞系。利用WST-8细胞增殖与细胞毒性检测试剂检测药物对细胞的抑制率。获取剩余的耐药细胞进行下一部分实验。根据抑制率实验的结果设计丝裂霉素C的浓度为：0.03mg/ml,0.5mg/ml,2mg/ml,并分别作为实验组B、C及D组。利用对照组细胞作为A组。利用流式细胞仪检测实验组及对照组细胞的细胞周期。利用实时荧光定量PCR及免疫印迹法分别检测实验组及对照组细胞中OCT-4及NANOG的表达。结果：细胞抑制率实验显示抑制率有浓度依赖性,随丝裂霉素C浓度的上升呈递增的走势。最大及最小抑制率分别为92.5%±1.0及64.1%±1.4(P0.001)。在最高药物浓度的作用下只有7.5%的细胞存活。流式细胞仪细胞周期检测显示对照组及实验组D组中分别有24.00%及83.99%细胞位于G0G1期,15.33%及63.24%的细胞位于S期(P0.05)。相对于对照组,在实验组的细胞中两种重要的干细胞标志物OCT-4及NANOG在蛋白及基因水平显著增高,并与丝裂霉素C的作用浓度呈浓度梯度。结论：利用丝裂霉素C作用24小时后,剩余的膀胱泌尿上皮癌细胞呈现出干细胞的特性。结合无血清培养技术,化疗药物筛选有望成为分离膀胱泌尿上皮癌干细胞的新策略。关键词：膀胱泌尿上皮癌论文肿瘤干细胞论文OCT-4论文NANOG论文
中文摘要4-5
Abstract5-7
缩略词表7-8
前言8-13
材料与策略13-23
结果23-28
讨论28-30
结论30-31