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摘要：目的观察SB203580对N--D-天门冬氨酸(NMDA)诱导培养的皮层神经元凋亡作用的影响,探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路与凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2基因蛋白(Bcl-2)，B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关x蛋白(Bax)的联系，并判定信号转导通路抑制剂对凋亡的作用。策略培养7天原代大鼠皮层神经元，随机分为五组：对照组、损伤组、SB203580低剂量组(10μmol/L组)、SB203580中剂量组(100μmol/L组)、SB203580高剂量组(1000μmol/L组)。噻唑蓝(MTT)比色实验评价细胞存活力,乳酸脱氢酶(LDH)释放率测定细胞损伤程度，吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重荧光染色观察细胞凋亡形态和数目，三者评定SB203580是否具有保护作用。运用免疫细胞化学法染色浅析及免疫蛋白印迹浅析统计大鼠皮层神经元各组p38MAPK，Bcl-2和Bax表达情况，以而探讨其可能的保护作用机制。结果①神经元鉴定：用免疫细胞化学ABC法，以抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体标记神经元，阳性神经元的比例为90.35％。②损伤模型的评估：不同浓度的NMDA对培养大鼠脑皮质神经细胞的损伤作用具有显著的剂量依赖联系。实验结果表明50μmol/L的NMDA对细胞的损伤以凋亡为主。③MTT法评价细胞存活力：与对照组比较，损伤组的OD值显著降低(P0.01)；与NMDA损伤组比较，SB203580低中高剂量组OD值均增高(P0.01或P0.05)，有统计学差别。④LDH漏出率测定细胞损伤程度：与对照组比较，NMDA损伤组LDH漏出率极显著升高(P0.01)；与损伤组比较，SB203580低中高剂量组LDH漏出率显著降低(P0.01)，有极显著性差别；SB203580低中高剂量组间比较有显著性差别(P0.05)。⑤AO/EB双重荧光染色可观察到凋亡细胞，低中高剂量组呈现剂量依赖联系，随着SB203580剂量的增加凋亡细胞数量减少。⑥免疫细胞化学法染色和免疫蛋白印迹结果显示：SB203580可以使Bax和P38MAPK表达下降，Bcl-2表达增加，与损伤组比较有统计学作用(P0.01)；低中高剂量组间比较有显著性差别(P0.01)，呈现剂量-反应联系。结论①SB203580对NMDA诱导的离体神经细胞的损伤有保护作用。与损伤组比较，各保护组细胞存活力增强；LDH释放率显著减少。②SB203580可以使p38MAPK和Bax表达下降，使Bcl-2表达增加，减少了细胞凋亡。③各实验组组间两两比较，各项实验指标均有统计学作用，说明在实验范围内SB203580的神经保护作用有剂量依赖联系；Bcl-2/Bax比值可以反映细胞的存活力。关键词：原代神经元培养论文凋亡论文N--D-天门冬氨酸论文SB203580论文p38丝裂原活化蛋白激酶论文B细胞淋巴瘤/白血病-2论文基因蛋白论文B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关x蛋白论文
中文论著摘要4-6
英文论著摘要6-8
英文缩略语表8-9
前言9-10
材料与策略10-16
实验结果16-29
讨论29-32
结论32-33
附图33-38
本探讨革新性的自我评价38-39