本站原创
摘要：目的：通过检测乙酰肝素酶(heparanase, HPA)和基质金属蛋白酶-9(matrix metal loproteinases-9, MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)与正常肺组织中的表达,初步探讨HPA和MMP-9在NSCLC的发生、浸润、转移中的作用。策略：用免疫组化SP法检测120例NSCLC组织(鳞癌60癌,腺癌60例)和30例正常肺组织中HPA和MMP-9的表达水平。NSCLC组织标本均取自四川省泸州医学院附属医院病理科,所有NSCLC患者均未作任何放疗或化疗。30例正常肺组织标本作对照。根据NSCLC标本组织分化程度将高-中分化为第一组,低分化为第二组；根据病理类型鳞癌为第一组,腺癌为第二组；根据患者临床及病理相关信息进行TNM分期：Ⅰ期为第一组,Ⅱ-Ⅲ期为第二组,Ⅳ期为第三组。所有组织标本用10%固定,以石蜡包埋,进行常规4μm连续切片。经石蜡切片进行常规脱蜡为无水后,予以蒸馏水冲洗,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer sapne, PBS)浸泡5min。高温高压修复抗原,然后取3%过氧化氢甲醇液孵育10min以便清除内源性过氧化酶的活性。其次取正常山羊血清封闭交叉反应产生的非特异性着色。滴加一抗(HPA兔抗人多克隆抗体的稀释度为1：50；MMP-9兔抗人多克隆抗体的稀释度为1：100)孵育,用PBS冲洗,以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。滴加生物素标记二抗进行孵育,用PBS冲洗,滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液(S-A/HRP)进行孵育,再用PBS冲洗,DAB显色,Mayer苏木精溶液轻度复染,酸化,蓝化,梯度脱水,透明,封片,最后用显微镜进行观察。要注意制约背景。HPA阳性主要表达于肿瘤细胞胞浆中,少数表达于细胞核内,均呈清晰棕褐色或棕黄细颗粒状或团块状；MMP-9阳性主要表达于肿瘤细胞胞浆及胞膜中,呈清晰棕褐色或棕细颗粒状或团块状,散在点状分布。按每张切片阳性细胞比例数、着色深浅划分为-+、++、+++共四个等级,以几乎不着色或着色细胞少于5%为(-),着色较淡或着色细胞占整张切片5%～25%为弱阳性(+),着色适中或着色细胞占整张切片26%～50%中度阳性(++),着色较深或着色细胞占整张切片大于50%强阳性(+++)。结果：(1)NSCLC组与正常肺组织组比较,HPA的表达水平和MMP-9的表达水平均不同,且NSCLC组的HPA与MMP-9表达水平均高于正常肺组织,差别有统计学作用(P0.05)。(2)腺癌组和鳞癌组的HPA表达水平差别无统计学作用(P0.05),而腺癌组和鳞癌组的MMP-9表达水平差别有统计学作用(P0.05)。(3)根据NSCLC的分化程度,低分化组的HPA和MMP-9表达水平均较高-中分化组高,差别有统计学作用(P0.05)。(4)根据TNM分期,Ⅰ期组、Ⅱ-Ⅲ期组和Ⅳ期组的HPA和MMP-9表达水平不建全相同,差别有统计学作用(P0.05)。且经两两比较,Ⅱ-Ⅲ期组HPA和MMP-9表达水平高于Ⅰ期组,Ⅳ期组的HPA和MMP-9表达水平高于Ⅰ期组、Ⅱ-Ⅲ期组,差别有统计学作用(P0.05)。(5)根据等级相关浅析,HPA与MMP-9在NSCLC中的表达成正相关(r=0.416,P0.005)。结论：(1)HPA和MMP-9参与了NSCLC的形成历程。(2)HPA和MMP-9在NSCLC的进展、浸润、转移方面起到了推动作用。(3)HPA和MMP-9在NSCLC中的发生进展中可能起到协同作用,共同推动NSCLC的发生进展。关键词：乙酰肝素酶(HPA)论文基质金属蛋白酶-9(MMP-9)论文非小细胞肺癌(NSCLC)论文
摘要3-5
Abstract5-8
前言8-10
材料与策略10-15
结果15-24
讨论24-33
结论33-34