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摘要：如其它癌症一样，前列腺癌是一个复杂的疾病，不同的治疗策略在特殊的患者群体中会产生不同的治疗效果，在美国每年大约有29,000名前列腺癌患者死于转移性疾病，由此需要探寻一种有效的治疗策略来制约前列腺癌的进展，近年来随着分子生物学、免疫学和其他相关学科的进展，基因治疗作为一种有效地治疗前列腺癌的策略，其显示了巨大的进展优势。腺病毒载体用于癌基因传递最为广泛；而特异性和疗效是这个治疗策略的主要瓶颈。在现有的腺病毒技术中，实用的具有条件复制型腺病毒(CRCAs)提供了一个最佳的策略。在我们以前的探讨中，利用RAPAd.I系统，我们构建了一个双特异性重组腺病毒，Ad-hTERTp-E1a-Apoptin是由肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抗癌基因Apoptin组成。这个条件复制型腺病毒的主要作用是具有抑制肿瘤特异性生长和肿瘤特异性复制。细胞凋亡经常使人类肿瘤细胞受损，它是一个重要的化疗诱导的肿瘤细胞死亡的机制。由此，对于癌症的治疗，细胞凋亡通过对促凋亡和抗凋亡蛋白的调节可作为一个强有力的和有效的策略。Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的蛋白，它可以诱导许多变形的细胞发生凋亡，而对正常细胞没有作用。hTERT启动子在大多数人类癌症中显示出了较高活性，而非宿主组织。它被认为是一个理想的肿瘤特异性溶瘤腺病毒调节器，hTERT启动子可以用于制约病毒基因调节，如腺病毒中的E1A基因，它可以限制溶瘤腺病毒在恶性细胞和组织中的复制，双特异性腺病毒启动子可以调节E1A在多种刺激下做出表达。肿瘤特异性启动子既能允许肿瘤特异性复制和调节E1A基因表达，也可以在一些肿瘤细胞复制。然而，这些病毒启动子元素结合成一个单一的病毒来调节E1A表达和病毒复制，hTERT启动子在超过90%的肿瘤中表达，其利用溶瘤病毒,结合这两种功能在广泛的人类肿瘤和肿瘤细胞群都有可能诱发溶瘤细胞的活动。在最近几年，基于利用溶瘤腺病毒的肿瘤基因治疗已被广泛用于临床前和临床试验。本探讨探讨基于hTERT启动子的表达Apoptin溶瘤腺病毒Ad-hTERTp-E1a-Apoptin对前列腺癌细胞的体内、外抑制作用。通过对感染重组腺病毒的前列腺癌细胞PC-3和RM-1运用96hMTT法,检测了重组腺病毒Ad-hTERTp-E1a-Apoptin对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制作用；分别运用AO/EB染色法、DAPI染色法、AnnexinV检测法对感染重组腺病毒48h的PC-3和RM-1进行相应的染色，浅析了Ad-hTERTp-E1a-Apoptin对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制方式；通过Caspase检测策略测定了重组腺病毒对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制方式。结果显示：除Ad-CMV-EGFP外，Ad-hTERTp-E1a-Apoptin、Ad-CMV-Apoptin和Ad-hTERTp-E1a-EGFP均不同程度地体现出对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制作用，其中Ad-hTERTp-E1a-Apoptin、Ad-hTERTp-E1a-EGFP的抑制作用普遍强于Ad-CMV-Apoptin3倍（P0.05）；且Ad-hTERTp-E1a-Apoptin抑制作用具有一定时效和剂效联系走势，48h抑制效率最佳。Ad-hTERTp-E1a-Apoptin可通过诱导凋亡途径抑制前列腺癌细胞PC-3和RM-1的增殖，致PC-3和RM-1细胞磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加、Caspase酶活性增强。在动物模型实验中，显示Ad-hTERTp-E1a-Apoptin可显著抑制肿瘤的生长和延长动物的寿命，提示Ad-hTERTp-E1a-Apoptin在前列腺癌基因治疗中具有潜在的运用价值。关键词：前列腺癌论文凋亡素论文重组腺病毒论文凋亡论文
前言4-6
中文摘要6-8
Abstract8-14
第一篇 文献综述14-47
第一章 前列腺癌治疗的探讨进展14-47
1.1 概述14
1.2 前列腺癌分级及分期14-16
1.3 前列腺癌诊断16
1.4 传统前列腺癌治疗16-17
1.5 前列腺癌基因治疗的基础论述17-24
1.6 基因转移系统24-30
1.7 基因合成转移系统30-31
1.8 前列腺癌基因治疗策略31-44
1.9 未来的方向44-46
1.10 APOPTIN 的运用46-47
第二篇 探讨内容47-81
第1章 重组腺病毒对前列腺癌细胞 PC-3 和 RM-1 的体外抑制作用47-64
1.1 材料与策略47-49
1.2 结果49-59
1.3 讨论59-62
1.4小结62-64
第2章 重组腺病毒对前列腺癌细胞 PC-3 和 RM-1 的抑制方式64-73
2.1 材料与策略64-67
2.2 结果67-70
2.3 讨论70-72
2.4 小结72-73
第3章 重组腺病毒的体内抑瘤作用探讨73-81
3.1 材料与策略73-75
3.2 结果75-78
3.3 讨论78-80
3.4 小结80-81
结论81-82