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摘要：目的：采取转化生长因子-β1(tranorming growth factor-β1, TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞株16HBE-14。构建上皮-间质转化(Epithepal-Mesenchymal Transition, EMT)模型,观察脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)对TGF-β1诱导的EMT的作用,并探讨其具体机制。策略：1.将16HBE-14。用含有5%胎牛血清的MEM培养基培养,5ng/ml TGF-β1作用16HBE-14o72h,观察细胞的形态变化,采取Western Blot(WB)检测E一钙粘素(E.cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-ooth muscle actin,α-A)表达。2.给予不同浓度(1μM、10μM、100μM)DHEA预处理细胞24h,后加入TGF-β1干预72h,检测策略同1。3.设DHEA100(DHEA终浓度为100μM)+TGF-β1组和TGF-β1组,在不同时间点(0、0.5h、1h、2h)采取WB检测两组细胞p-T及T的变化历程。4.分别予雄激素受体(androgen receptor,AR)拮抗剂氟他胺、PI3K抑制剂LY294002(LY)或PI3K激动剂IGF-1预处理细胞,设八组,分别为(1)无处理组；(2)TGF-β1组；(3)DHEA100+TGF-β1组；(4)DHEA100+TGF-β1+氟他胺组；(5)TGF-β1+LY组；(6)TGF-β1+IGF-1组；(7)TGF-β1+DHEA100+LY组；(8)TGF-β1+DHEA100+IGF-1组,TGF-β1共同干预1h后立即收集细胞,WB检测各组细胞p-T及T的变化。各组细胞加入TGF-β1培养72h后立即收集细胞,WB检测各组细胞E-cadherin.α-A表达。结果：1. TGF-β1作用72h后,细胞鹅卵石外观变为梭形,细胞间连接疏松。E-cadherin表达下降；α-A表达增强。2.不同浓度DHEA对TGF-β1诱导EMT均有抑制作用,且呈浓度依赖性,100μMDHEA抑制作用最强。3. TGF-β1组、DHEA100+TGF-β1组均在TGF-β1处理后,p-T蛋白表达增加,1h达到高峰。DHEA抑制p-T蛋白表达,T蛋白表达无显著差别(P0.05)。4.氟他胺可减轻DHEA对p-T蛋白表达及EMT历程的抑制作用。5.LY可进一步降低p-T蛋白表达及EMT历程；IGF-1推动p-T蛋白表达及EMT发生。结论：1. TGF-β1能诱导16HBE-14o发生EMT。2. DHEA对TGF-β1诱导的EMT有抑制作用,且呈浓度依赖性。3. DHEA通过AR而发挥对TGF-β1诱导的EMT的抑制作用。4. DHEA对EMT的抑制作用与PI3K/T信号途径有关。关键词：16HBE-14o论文上皮-间质转变论文脱氢表雄酮论文转化生长因子-β1论文PI3K／T信号途径论文
摘要4-6
ABSTRACT6-9
目录9-11
縮略词表11-12
前言12-15
第一章 材料与策略15-26
1.1 实验对象15
1.2 仪器设备与试剂15-17
1.2.1 仪器设备15-16
1.2.2 主要试剂与耗材16-17
1.3 试剂的配制17-20
1.4 实验策略20-25
1.4.1 16HBE-14o细胞的培养20-21
1.4.2 实验分组及给药案例21-23
1.4.3 Western Blot检测23-25
1.5 统计浅析25-26
第二章 结果26-37
2.1 TGF-β1诱导EMT模型的建立26-27
2.2 不同浓度DHEA对TGF-β1诱导EMT的抑制作用27-30
2.3 TGF-β1处理后不同时间点p-T及T蛋白表达变化30-32
2.4 各组细胞p-T及T蛋白表达变化32-34
2.5 各组细胞E-cadherin及α-A蛋白表达变化34-37
2.5.1 各组细胞E-cadherin蛋白表达变化34-35
2.5.2 各组细胞α-A蛋白表达变化35-37
第三章 讨论37-43
3.1 EMT与哮喘气道重塑的联系37-38
3.2 TGF-β1诱导EMT模型的建立38-39
3.3 DHEA通过AR发挥对EMT的作用39-40
3.4 DHEA对EMT的抑制作用可能与PI3K/T途径有关40-43
第四章 结论43-44