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摘要：目的：探讨体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的策略,证实提纯的骨髓间充质干细胞与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)共培养,可定向诱导分化为神经细胞。策略：1.选用健康SD大鼠,采取全骨髓贴壁法体外培养、纯化MSCs。2.采取流式细胞术进行细胞表型鉴定,测定CD34、CD44、CD45、CD90的阳性细胞百分率。3.分别采取对照组、GDNF组对MSCs进行诱导分化探讨。4.采取倒置相差显微镜连续观察细胞生长情况及形态变化。采取免疫组化法检测神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白(Nestin),神经细胞的特异性标志神经元特异性烯醇化酶(neon-specific enolase, NSE)。结果：原代提取获得的骨髓间充质干细胞呈梭形,类似于成纤维细胞,培养第4代的MSCs形态均一性较好,经流式细胞仪检测纯度较高,四种细胞表型的阳性率分别是：CD34:3.98%, CD44:98.74%, CD45:1.03%, D90:98.08%。MSCs经GDNF诱导后,细胞胞体逐渐向胞核收缩,变形细胞逐渐增加,出现双极、多极和锥形典型的神经细胞形态,细胞边缘出现突起,且与邻近细胞突起逐渐相互连接。GDNF组分别于诱导后6h出现nestin表达阳性,24h后诱导达顶峰。12h检测到神经细胞的特异性标志NSE表达阳性,且表达强度随时间逐渐增加,48h后诱导达顶峰。72h观察到诱导细胞逐渐凋亡脱落。阴性对照组未出现神经细胞的形态变化及特异性标志的阳性表达。结论：大鼠骨髓间充质干细胞可通过全骨髓贴壁法在体外进行原代提取分离及传代培养,所获得细胞生长稳定、增殖迅速,经GDNF诱导后具有向神经元样细胞分化的潜能。关键词：骨髓间充质干细胞论文胶质细胞源性神经营养因子论文诱导论文分化论文
中文摘要2-3
英文摘要3-5
目录5-6
缩略语6-7
前言7-10
材料与试剂10-12
策略12-15
结果15-22
讨论22-27
小结27-28