摘要：毛细管胶束电动色谱法(MECC)是一种基于毛细管区带电泳和胶束增溶相结合的色谱策略,具有快速、高效、操作简单、适用于各种带电粒子及中性分子分离的优点,被广泛运用于药物浅析、生物化学和生命科学等领域。本论文归纳概述了毛细管胶束电动色谱的工作原理和影响因素,并较为系统的综述了毛细管胶束电动色谱法在中药活性成分分离浅析中的进展情况。在此基础上,运用毛细管胶束电动色谱技术,在优化了电泳条件后,建立了几种中药系统中主要活性成分的分离浅析新策略。具体探讨工作内容如下：1.分别采取单因素变换法和正交试验设计法优化了毛细管胶束电动色谱法同时分离紫杉醇、7-表紫杉醇、7-表-10-去乙酰基紫杉醇及三尖杉宁碱的分离条件,确定了运转缓冲溶液为含有40mmol/L SDS及40%(v/v)乙腈的硼砂缓冲液(pH9.36,硼砂浓度为20mM),电泳仪器条件为：分离电压25kV,柱温25℃,检测波长211nm,采取压力(0.5psi,3447.38Pa)进样5.0s。在此电泳条件下,紫杉醇、7-表-紫杉醇、7-表-10-去乙酰基紫杉醇及三尖杉宁碱在25min内实现了有效分离,策略的线性范围对于紫杉醇为2.5-250μg/mL,对于7-表-紫杉醇、7-表-10-去乙酰基紫杉醇及三尖杉宁碱均为0.5-250μg/mL。将此策略用于红豆杉树木不同部位中这四种组分的定量浅析,测定结果的相对标准偏差在5%以内,加标回收率在95～105%之间,结果令人满意。2.以SDS作为表面活性剂,采取毛细管胶束电动色谱方式,探讨了儿茶素、秦皮乙素、东莨菪素、咖啡酸及熊果酸的分离浅析策略。实验分别采取单因素变换法和正交试验设计法对电解质溶液进行了优化,这两种策略得到了一致的实验结果,即采取含20mmol/LSDS.5％(v/v)乙腈和15mmol/Lβ-CD的硼砂缓冲液(pH9.11,硼砂浓度为20mmol/L)为电解质溶液。在上面陈述的电解质溶液中,选用22kV的分离电压,25℃的毛细管柱温,0.5psi压力进样5.0s,所探讨的5种组分在20rmin内得到了有效分离与检测。策略的线性范围对于儿茶素、秦皮乙素和东莨菪素均为0.5-100.0μg/mL,对于咖啡酸为1.5-100.0μg/mL,对于熊果酸为2.5-100.0ug/mL。用该策略浅析了草珊瑚、水杨梅、夏枯草、紫花地丁中这5种组分的含量,测定结果的相对标准偏差在5%以内,加标回收率在95～105%之间,说明策略稳定可靠,具有一定的实用价值。3.考虑到难以带上电荷以及及双氢光吸收能力较弱的不足,建立了一个同时分离浅析青蒿中及双氢的场放大样品堆积-胶束毛细管电动色谱-二极管阵列检测策略。该策略在20kV分离电压和25℃柱温下,以含20mmol/L SDS和15mmol/L β-环糊精的硼砂-氢氧化钠缓冲溶液(pH9.11,硼砂浓度为20mmol/L)为运转电解质进行电泳分离；进样(0.5psi(3447.38Pa)压力进样5.0s)前先在毛细管中用压力(0.5psi)注入高纯水10s,实现和双氢的柱上在线富集；以PDA检测器在195nm对组分进行检测。在上面陈述的条件下,及双氢在12rmin内得到了有效分离与检测,策略的线性范围对于和双氢分别为60-300和65-300μg/mL,将其用于不同产地青蒿中双氢和的测定,相对标准偏差在5%以内,回收率在98%-104%之间。4.采取单因素变换法探讨了缓冲溶液浓度及pH值、有机添加剂种类及浓度、仪器条件对分离的影响,最终选择了含10%(v/v)乙腈,5%(v/v)乙二醇和1%(v/v)正丁醇的硼砂缓冲液(pH9.98,硼砂浓度为20mmol/L)作为运转缓冲溶液,分离电压20kV,柱温25℃,检测波长211nm,压力(0.5psi,3447.38Pa)进样5.0s的电泳条件,建立了未见文献报道的同时分离测定龙血素A和龙血素B的高效毛细管电泳法,并用该策略对不同产地的龙血竭样品进行了浅析测定。结果表明,策略用于实际样品浅析的加标回收率在95%-110%之间,相对标准偏差在5%以内。关键词：毛细管胶束电动色谱论文正交试验设计论文中药活性成分论文分离论文测定论文
中文摘要3-5
Abstract5-10
第一章 毛细管胶束电动色谱及其在中药活性成分分离浅析中的运用10-22
1 毛细管胶束电动色谱的基本原理及影响因素10-14
1.1 毛细管胶束电动色谱的基本原理10-11
1.2 毛细管胶束电动色谱的影响因素11-14
2 MECC在中药活性成分分离浅析中的运用14-20
3 本论文的探讨作用、目的与内容20-22
第二章 胶束毛细管电动色谱法同时分离测定紫杉醇及紫杉烷类化合物的探讨22-35
1 引言22
2 实验部分22-24
2.1 仪器与试剂22-23
2.2 溶液配制23-24
2.3 实验策略24
2.4 论述计算24
3 结果与讨论24-34
3.1 实验条件的单因素变换法优化24-28
3.2 实验条件的正交试验设计优化28-31
3.3 仪器条件对分离的影响31-32
3.4 工作曲线与策略精密度32-33
3.5 样品浅析33-34
4 结论34-35
第三章 胶束毛细管电色谱法分离测定儿茶素、秦皮乙素、东莨菪素、咖啡酸及熊果酸的探讨35-49
1 引言35
2 实验部分35-37
2.1 主要仪器与试剂35-36
2.2 溶液配制36-37
2.3 实验策略37
2.4 论述计算37
3 结果与讨论37-47
3.1 单因素变换法优化电解质溶液37-41
3.2 正交试验设计优化电解质溶液41-44
3.3 仪器条件对分离的影响44-45
3.4 工作曲线与策略精密度45-46
3.5 样品浅析46-47
4 结论47-49
第四章 场放大样品堆积-胶束毛细管电动色谱法分离测定青蒿中及双氢的探讨49-58
1 引言49-50
2 实验部分50-51
2.1 主要仪器与试剂50
2.2 溶液配制50-51
2.3 实验策略51
3 结果与讨论51-57
3.1 缓冲液pH值及硼砂浓度对分离的影响51-52
3.2 十二烷基硫酸钠(SDS)溶液及其浓度对分离的影响52-53
3.3 β-环糊精(β-CD)及其浓度对分离的影响53-54
3.4 分离电压对分离的影响54
3.5 在线富集分离历程54-56
3.6 工作曲线和策略精密度56
3.7 样品浅析56-57
4 结论57-58
第五章 龙血素A和龙血素B的高效毛细管电泳分离浅析58-70
1 引言58-59
2 实验部分59-60
2.1 主要仪器与试剂59
2.2 溶液配制59-60
2.3 实验策略60
2.4 论述计算60
3 结果与讨论60-69
3.1 缓冲溶液pH值对分离的影响以及组分pKa值的测定60-62
3.2 缓冲溶液中硼砂浓度对分离的影响62-63
3.3 有机添加剂对分离的影响63-66
3.4 仪器条件的选择66-67
3.5 工作曲线和策略精密度67
3.6 样品浅析67-69
4 结论69-70
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