摘要4-6
Abstract6-17
1 绪论17-36
1.1 课题背景17-18
1.1.1 课题来源17
1.1.2 课题的目的和作用17-18
1.2 国内外探讨进展18-35
1.2.1 桑黄的探讨概况18-21
1.2.2 灵芝的探讨概况21-26
1.2.3 黑木耳探讨概况26-28
1.2.4 药用真菌与癌症治疗28-30
1.2.5 线粒体凋亡通路30-35
1.3 探讨的主要内容35-36
2 桑黄多糖抑制肝癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡的作用36-52
2.1 实验材料与仪器36-39
2.1.1 材料36
2.1.2 试剂36-37
2.1.3 仪器37
2.1.4 试剂配制及培养基37-39
2.2 实验策略39-42
2.2.1 细胞培养39
2.2.2 桑黄多糖的提取及含量测定39-40
2.2.3 小鼠淋巴细胞增值率测定40-41
2.2.4 桑黄多糖分离与纯化41
2.2.5 细胞增殖试验41
2.2.6 细胞活力试验41
2.2.7 软琼脂克隆试验41
2.2.8 细胞粘附试验41-42
2.2.9 细胞侵袭试验42
2.2.10 细胞周期检测试验42
2.2.11 数据统计学浅析42
2.3 结果与浅析42-49
2.3.1 桑黄粗多糖的提取分离42-44
2.3.2 小鼠淋巴细胞增值率测定44
2.3.3 粗多糖PLP60的纯化44-45
2.3.4 PLP60-B1组分对HepG2细胞增殖的抑制作用45-47
2.3.5 软琼脂克隆试验47
2.3.6 多糖PLP60-B1组分对HepG2细胞粘附和侵袭的抑制作用47-48
2.3.7 流式细胞术检测HepG2细胞周期分布48-49
2.4 讨论49-50
2.5 本章小结50-52
3 桑黄多糖对EHV-1疫苗免疫Balb/c鼠的免疫调节作用52-66
3.1 实验材料与仪器53-54
3.1.1 材料53
3.1.2 试剂与培养基53-54
3.1.3 仪器54
3.2 实验策略54-60
3.2.1 桑黄多糖的提取54
3.2.2 疫苗EHV-1的制备54-56
3.2.3 病毒TCID_(50)测定56-57
3.2.4 动物分组及处理57
3.2.5 抗体效价的测定57-59
3.2.6 T淋巴细胞亚群的检测59
3.2.7 肺脏的病理观察59
3.2.8 人工感染Balb/c小鼠病毒检测59-60
3.3 结果与浅析60-64
3.3.1 桑黄多糖(PL)对EHV-1抗体效价的影响60-61
3.3.2 桑黄多糖(PL)对外周血CD3~+淋巴细胞的影响61
3.3.3 桑黄多糖(PL)对外周血CD4~+/CD8~+比值的影响61-62
3.3.4 病理切片HE染色结果浅析62-63
3.3.5 攻毒后病毒检测情况63-64
3.4 讨论64-65
3.5 本章小结65-66
4 真菌多糖抑制肝癌细胞增殖信号通路的探讨66-84
4.1 实验材料67-68
4.1.1 试验材料67
4.1.2 试验试剂67
4.1.3 抗体67-68
4.1.4 实验仪器68
4.1.5 试剂配制及培养基68
4.2 实验策略68-72
4.2.1 细胞培养68-69
4.2.2 桑黄、灵芝和黑木耳多糖提取及含量测定69
4.2.3 细胞增殖试验69
4.2.4 细胞软琼脂克隆试验69
4.2.5 电镜(TEM)试验69
4.2.6 流式细胞术浅析69-70
4.2.7 细胞周期检测70
4.2.8 蛋白质免疫印迹70-72
4.3 结果与浅析72-80
4.3.1 真菌多糖对HepG2细胞增殖的抑制作用72-73
4.3.2 真菌多糖对HepG2和Bel-7404细胞增殖的软琼脂试验73-74
4.3.3 真菌多糖诱导HepG2和Bel-7404细胞凋亡试验74-75
4.3.4 电镜观察真菌多糖诱导HepG2和Bel-7404细胞凋亡75
4.3.5 细胞周期试验75-77
4.3.6 HepG2和Bel-7404细胞中p21~(Cip1),p27~(Kip1)和cycpn/CDK的水平77-78
4.3.7 HepG2和Bel-7404细胞中P13K/PTEN/T途径的表达水平78-79
4.3.8 HepG2和Bel-7404细胞中线粒体途径的表达水平79-80
4.4 讨论80-82
4.5 本章小结82-84
5 真菌多糖调控HepG2细胞差别表达蛋白的鉴定与浅析84-102
5.1 实验材料与仪器84-85
5.1.1 试验材料84
5.1.2 试验试剂84
5.1.3 实验仪器84-85
5.2 实验策略85-87
5.2.1 双向电泳的样品制备85
5.2.2 跑胶85
5.2.3 蛋白点浅析85-86
5.2.4 质谱的浅析和鉴定86
5.2.5 Western blot鉴定86
5.2.6 实时荧光定量PCR86-87
5.3 结果与浅析87-99
5.3.1 总蛋白质的表达谱87-88
5.3.2 Imaging Master 2D凝胶图像浅析88-89
5.3.3 蛋白差别点的质谱鉴定89-93
5.3.4 差别表达蛋白质细胞定位93
5.3.5 验证试验93-99
5.4 讨论99-100
5.5 本章小结100-102
结论102-104