简论抗氧化重组人Kallistatin蛋白发酵罐制备技术与抗肝纤维化相关生物活性

摘要3-4

Abstract4-8

第1章 引言8-15

1.1 Kalpstatin 概述8-11

1.1.1 Kalpstatin 的发现及分布8

1.1.2 Kalpstatin 的生物学功能8-11

1.2 肝纤维化药物研发概述11-12

1.3 毕赤酵母表达系统概述12-14

1.3.1 毕赤酵母表达系统的优势12-13

1.3.2 毕赤酵母表达系统表达量的影响因素13

1.3.3 提升外源蛋白的表达效率13-14

1.4 课题的来源及探讨作用14-15

第2章 重组人 Kalpstatin 蛋白的发酵罐制备、纯化、鉴定15-39

2.1 材料15-20

2.1.1 试剂、药品与菌株15-16

2.1.2 主要实验仪器16-17

2.1.3 溶液配制17-20

2.2 实验策略20-29

2.2.1 高表达 GS115-KAL 毕赤酵母工程菌株的建立20-23

2.2.2 发酵罐技术大规模制备 KAL 蛋白23-25

2.2.3 KAL 蛋白的纯化和鉴定25-29

2.2.4 统计浅析29

2.3 实验结果29-38

2.3.1 菌种的筛选与鉴定29-31

2.3.2 重组人 Kalpstatin 蛋白发酵31-33

2.3.3 KAL 蛋白的纯化和鉴定33-38

2.4 本章小结38-39

第3章 重组人 Kalpstatin 蛋白抗肝纤维化相关生物学活性探讨39-78

3.1 材料39-42

3.1.1 试剂、药品、细胞39

3.1.2 主要实验仪器39

3.1.3 溶液配制39-42

3.2 实验策略42-47

3.2.1 大鼠原代肝星状细胞的分离纯化42-43

3.2.2 细胞培养、冻存与复苏43-44

3.2.3 氧化应激模型构建44-45

3.2.4 细胞活性检测45

3.2.5 细胞凋亡检测45

3.2.6 细胞迁移性检测45-46

3.2.7 小管形成实验46

3.2.8 细胞内超氧化物检测46-47

3.2.9 免疫细胞化学47

3.2.10 统计浅析47

3.3 实验结果47-77

3.3.1 细胞氧化应激模型的构建47-57

3.3.2 KAL 蛋白对细胞增殖的作用57

3.3.3 KAL 蛋白的抗氧化作用57-71

3.3.4 KAL 蛋白对血管生成的作用71-75

3.3.5KAL 蛋白对大鼠原代肝星状细胞的作用75-77

3.4 本章小结77-78

第4章 总结78

革新点78

后续工作78-80