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纯化酶法结合膜技术制备精品肝素钠工艺址

收藏本文 2024-02-11 点赞:7006 浏览:23155 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:本论文探讨了肝素钠的提取及纯化工艺:采取碱性条件下酶解的策略得到肝素钠粗提液,通过膜技术除去粗提液中的杂质,然后,利用树脂吸附工艺纯化膜除杂浓缩液,最后醇沉树脂洗脱液得到肝素钠,并且比较了几种干燥方式,最终选取冷冻干燥得到产品肝素钠,实验得到的参数为工业化设计提供了基础数据。在保证肝素钠生物活性的前提下,本论文采取了先变性再碱性酶解的策略提取肝素钠,料液比为1:1,NaCl浓度为3.5%,温度55℃,pH值为9.5,酶解时间为3.5h。此条件均比较温和,在避开了肝素在提取历程中丧失生物活性的前提下,获得了比较高的提取率。肝素钠粗提液采取膜技术初步纯化,经过温度40℃条件下,操作压力为0.2MPa的微滤膜,能有效除去溶液中的大分子蛋白、悬浮颗粒、核酸等杂质,同时肝素钠的透过率较高。微滤膜滤液采取两步超滤膜进一步除杂浓缩,对肝素钠的截留率为93%,浓缩倍数为10倍。整个历程达到了较好的除杂效果。为进一步纯化膜除杂液体,本论文探讨了D204、D208、D202和D254四种树脂吸附膜浓缩液体中肝素钠的能力,综合树脂成本,最终选用了D208树脂,该树脂有着高效的吸附能力,也同样拥有较好的解吸率。在静态吸附实验中,确定了吸附参数,pH为8.5、温度为45℃、吸附溶液中NaCl浓度尽量制约在较低的范围。采取动态吸附进行纯化时确定了上样量为4倍的树脂体积,流速为2.0BV/h,洗脱液NaCl的浓度为4mol/L,流速为1.5BV/h。整个吸附洗脱历程中肝素钠的损失率仅为1.29%。同时考察了乙醇沉淀肝素钠所需的乙醇浓度,最后确定了冷冻干燥的干燥方式得到肝素钠产品,并且,产品的单位效价达到160U/mg。本论文还对肝素钠产品粉末的稳定性做了探讨,验证了pH、温度、光照、氧化剂等外在因素对肝素钠的稳定性的影响,为肝素钠的保存制剂环境提供了参考指标。关键词:小肠粘膜论文肝素钠论文膜分离论文树脂纯化论文

    摘要4-5

    Abstract5-7

    目录7-10

    第1章 绪论10-21

    1.1 小肠粘膜及肝素钠的概述10-12

    1.1.1 生猪产业概述10

    1.1.2 猪小肠概述10-11

    1.1.3 肝素11-12

    1.1.4 肝素钠12

    1.2 肝素钠的性质概述12-17

    1.2.1 肝素钠的理化性质12-13

    1.2.2 肝素钠的结构功能13-15

    1.2.3 肝素钠的运用进展前景15-17

    1.3 肝素钠的探讨近况17-19

    1.3.1 肝素钠的提取工艺17

    1.3.2 肝素钠的精制工艺17-18

    1.3.3 肝素钠的检测18-19

    1.4 本课题的探讨内容、策略及作用19-21

    第2章 肝素钠的提取21-31

    2.1 肝素钠提取工艺浅析21

    2.2 实验材料与检测策略21-22

    2.2.1 实验材料及药品21-22

    2.2.2 实验仪器22

    2.2.3 检测与浅析策略22

    2.3 实验策略22-28

    2.3.1 提取工艺流程22-23

    2.3.2 最佳用酶23-24

    2.3.3 最佳酶解条件24-28

    2.4 正交实验28-30

    2.4.1 正交因素水平及结果28-30

    2.4.2 验证性实验30

    2.5 本章小结30-31

    第3章 肝素钠粗提液的膜除杂浓缩31-42

    3.1 膜技术31-35

    3.1.1 膜技术概述31-32

    3.1.2 膜的选择32-33

    3.1.3 本实验中采取的膜技术33

    3.1.4 膜污染与清洗33-35

    3.2 实验材料与仪器35-36

    3.2.1 实验材料及药品35

    3.2.2 实验仪器35

    3.2.3 测量与浅析策略35-36

    3.3 膜除杂实验36-39

    3.3.1 微滤实验案例36-37

    3.3.2 结果与讨论37-38

    3.3.3 超滤实验案例38

    3.3.4 结果与讨论38-39

    3.4 膜浓缩实验39-40

    3.4.1 实验策略39-40

    3.4.2 结果与讨论40

    3.5 验证试验40-41

    3.6 本章小结41-42

    第4章 肝素钠浓缩液的精制42-55

    4.1 实验药品与仪器42-43

    4.1.1 实验药品42

    4.1.2 实验仪器42

    4.1.3 实验策略42-43

    4.2 树脂预处理与再生43

    4.2.1 树脂预处理43

    4.2.2 树脂再生43

    4.3 筛选树脂实验43-45

    4.3.1 实验策略43-44

    4.3.2 结果与讨论44-45

    4.4 静态吸附实验45-47

    4.4.1 实验策略45

    4.4.2 结果与讨论45-47

    4.5 动态吸附实验47-49

    4.5.1 实验策略47-48

    4.5.2 结果与讨论48-49

    4.6 动态洗脱实验49-51

    4.6.1 实验策略49-50

    4.6.2 结果与讨论50-51

    4.7 肝素钠的沉淀51-52

    4.7.1 实验策略51-52

    4.7.2 结果浅析与讨论52

    4.8 肝素钠的干燥52-53

    4.9 验证试验53

    4.10 本章小结53-55

    第5章 肝素钠性质的探讨55-61

    5.1 实验药品与仪器55

    5.1.1 实验药品55

    5.1.2 实验仪器55

    5.2 实验内容及策略55-59

    5.2.1 物理性质的探讨56

    5.2.2 稳定性探讨56-59

    5.3 本章小结59-61

    第6章 结论61-63

    6.1 总结61-62

    6.2 本论新62

    6.3 展望62-63

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