探究干细胞卵巢癌干细胞分离、培养与其抗原鉴定书写

摘要：目的：采取不同的策略分离培养卵巢癌组织及其细胞系A2780中的卵巢癌干细胞,并通过不同的策略对其进行鉴定,确定其为卵巢癌干细胞,并对其表面抗原进行鉴定,为下一步肿瘤多肽疫苗的探讨奠定基础。策略：(1)卵巢癌干细胞的分离、培养：常规消化肿瘤组织,红细胞裂解液裂解红细胞,采取磁珠分选仪分选CD133+卵巢癌干细胞,而后采取无血清干细胞培养液培养卵巢癌干细胞。卵巢癌患者腹水来源肿瘤干细胞分离培养,采取全腹水离心红细胞裂解液裂解红细胞,然后采取干细胞培养液培养卵巢癌干细胞。卵巢癌细胞系来源卵巢癌干细胞的培养,采取干细胞培养基诱导培养。(2)卵巢癌干细胞的鉴定：利用步骤1得到的卵巢癌干细胞进行CD133流式细胞检测和免疫荧光染色鉴定肿瘤干细胞,并通过克隆集落形成实验、传代时间和次数、基质胶分化实验了解卵巢癌自我更新和多向分化能力；体内成瘤实验分别以100及1000个细胞数植入3-4周龄NOD/SCID鼠右腋下,观察肿瘤形成差别。(3)卵巢癌干细胞表面抗原的鉴定：利用定量PCR的策略鉴定卵巢癌和我们所得到的卵巢癌干细胞表面抗原的差别。很多抗原及基因都可能在卵巢癌干细胞中表达,选择更有代表性更有作用的抗原进行鉴定,为下一步抗原表位疫苗的设计的探讨打下基础,为临床靶向治疗卵巢癌提供靶分子。结果：(1)组织和细胞株种来源的卵巢癌细胞用干细胞培养液培养。观察细胞大约在3-5天成球并且成悬浮状成长,接种与六孔板中培养,会再次形成50-100个细胞的细胞球,观察细胞成球和克隆集落形成的情况符合干细胞的特点；(2)通过磁性分选得到的CD133+细胞群的CD133表达率达到了82.54%,利用A2780干细胞培养基诱导培养成球后,经过流式细胞仪鉴定CD133表达率约为92.69%；通过免疫荧光、PCR、分化实验、成瘤实验等进一步证明了我们所得到的细胞为卵巢癌细胞；(3)鉴定卵巢癌细胞与卵巢癌干细胞中Sp17、OY-TES-1、LAGE、AP3、DPPA2等抗原的表达情况显示,以上抗原在干细胞中的表达均比卵巢癌中的抗原表达高。结论：成功分离了体外培养的卵巢癌细胞中的卵巢癌干细胞、采取了干细胞培养基培养卵巢癌干细胞,并采取了不同的策略以不同方面鉴定了卵巢癌干细胞。进一步对卵巢癌与卵巢癌干细胞的表面抗原表达进行了比较浅析,为下一步多肽疫苗的探讨打下基础。关键词：卵巢癌论文干细胞论文卵巢癌干细胞论文CD133论文

中文摘要4-6

Abstract6-12

第一章 引言12-21

1.1 探讨的背景、目的及作用12-18

1.1.1 干细胞与肿瘤干细胞12-15

1.1.1.1 干细胞定义12-13

1.1.1.2 肿瘤干细胞论述13-14

1.1.1.3 干细胞与肿瘤干细胞之间的联系14-15

1.1.2 卵巢癌与卵巢癌干细胞15-18

1.1.2.1 卵巢癌的治疗近况15

1.1.2.2 卵巢癌干细胞探讨进展15-16

1.1.2.3 卵巢癌干细胞的分离策略探讨近况16-17

1.1.2.4 卵巢癌干细胞表面相关分子机制17-18

1.1.3 未来的探讨方向18

1.2 探讨思路、策略及内容18-19

干细胞的免疫荧光检测29-30

2.3.4 A2780干细胞标志物的PCR鉴定30-31

2.3.5 肿瘤干细胞的分化实验31

2.3.6 成瘤实验31-32

2.4 讨论32-34