试述大黄鱼养殖大黄鱼和海水鲈鱼冷藏过程中特定腐败菌鉴别书写

摘要：我国是水产品产量居世界第一的水产品大国,养殖大黄鱼和海水鲈鱼是我国沿海居民常用的食用鱼种。因其肉质鲜嫩味美,富含人体必需氨基酸及丰富的维生素,倍受欢迎。然而,由于两种养殖海水鱼富含蛋白质和脂肪酸,尤其是不饱和脂肪酸含量较高,肌肉组织较松软,蛋白酶活性较强,鲜活鱼捕捞死亡后,僵直期较短,鱼体的新鲜度很快下降。另一方面,随着经济的进展,生活水平的提升和人口素质的提升,国内外市场对水产品的质量与安全、水产品品质和鲜度提出更高的要求。由此,如何保持海水鱼在低温流通历程中品质和鲜度该目前的水产品保鲜技术提出了很大挑战。而水产品贮藏历程中体内内生酶和微生物的繁殖是引起品质劣变的主要理由,鱼类的腐败主要是微生物的活动引起的。由此探讨水产品贮藏历程中的微生物菌群变化,查明特定腐败菌,是进行品质变化监控和抑制水产鱼类腐败变质的前提和基础。鉴于此,本论文通过感官品评、理化指标、微生物培养策略和分子生物学技术系统评价了养殖大黄鱼和海水鲈鱼在冷藏条件下品质的劣变规律和细菌群落变化走势；通过腐败能力浅析确定了产H2S菌株均质是引起两种鱼类腐败变质的优势腐败菌,并进一步分离和鉴定了特定腐败菌,探讨为后续特定腐败菌的致腐机制和靶向抑制探讨奠定了良好的基础。主要结论如下：1、养殖大黄鱼和海水鲈鱼在冷藏期间,贮藏温度对两种海水鱼的品质具有显著影响,其中冰温贮藏-2℃比4℃能更好的保持鱼体的鲜度,具有降低感官评分、pH、K值和TVB-N的积累,延缓了细菌的增殖,养殖大黄鱼和海水鲈鱼在-2℃比在4℃下货架期延长了7d。在冷藏期间养殖大黄鱼比海水鲈鱼更容易腐败,4℃条件下海水鲈鱼比养殖大黄鱼的保鲜期延长3d,-2℃下海水鲈鱼的货架期比养殖大黄鱼延长7d,可能是养殖大黄鱼比海水鲈鱼肉质更细腻,蛋白含量更高,有利于细菌繁殖,导致组胺等不良气味和异味迅速积累。采取选择性培养基浅析了两种养殖海水鱼在冷藏期间5种细菌的变化,随着贮藏时间的延长,细菌总数显著增加,冰温贮藏能显著延缓细菌的增加,其中LA比PCA更适合用于海水鱼类的细菌总数评价；产H2S菌株、检测单胞菌和明亮发光杆菌与细菌总数增加走势相似,其中产H2S菌株增加最快,而乳酸菌和肠杆菌增加较缓慢。2、建立了PCR-DGGE浅析养殖大黄鱼和海水鲈鱼的冷藏历程中菌群动态变化的检测技术,通过测序策略鉴定了两种养殖鱼类中优势腐败菌。PCR-DGGE图谱区系多样性浅析显示,两种养殖鱼类随着贮藏时间的延长,DGGE图谱的多样逐步增加,优势条带信号强度增强；同一品种鱼在不同贮藏温度下,体现相似的多样性变化,而不同品种的DGGE图谱具有显著的差别；LH和PCA培养策略比直接抽提法能获得更多的优势菌种条带,并且带明亮度高。测序结果显示,养殖大黄鱼冷藏历程中主要细菌为希瓦氏菌和检测单菌属,在测序菌株分别占50%和40%,而海水鲈鱼冷藏历程中主要细菌也是希瓦氏菌和检测单菌属,在测序菌株分别占40%和20%,但两种海水鱼中的分离株不同。由此PCR-DGGE和选择性培养策略得到的结果较一致,两种海水鱼类冷藏历程中优势菌群是产H2S菌株菌和检测单胞菌属。3、通过感官品评浅析了接种产H2S菌株、检测单胞菌和明亮发光杆菌的无菌鱼块在冷藏历程中的腐败特点,结果显示产H2S菌株腐败能力最强,检测单胞菌和明亮发光杆菌次之,其中产H2S菌株和检测单胞菌出现显著的臭味等腐败味,而明亮发光杆菌主要引起表皮色泽的转变。由此,产H2S菌株是引起两种养殖鱼类品质劣变的优势腐败菌。进一步评价了产H2S菌株各个分离菌株的腐败特点,结果显示产H2S菌株的12个分离株菌具有较强的腐败能力,其中养殖大黄鱼XH6和海水鲈鱼XL4腐败能力最强,通过浅析TVB-N、 TMA和腐败菌数,与感官变化走势一致,确定了产H2S菌株XH6和XL4是特定腐败菌。4、通过革兰氏染色、生理生化和16SrDNA技术鉴定了产H2S菌株XH6和XL4,两个菌株均为G-杆菌,生化和16SrDNA结果一致,特定腐败菌XH6和XL4为腐败希瓦氏菌。关键词：养殖大黄鱼论文海水鲈鱼论文保鲜论文货架期论文腐败优势菌论文产H_2S菌株论文

摘要3-6

ABSTRACT6-13

第1章 引言13-23

1.1 水产品微生物探讨近况浅析13-17

1.1.1 水产品中的微生物形态学13-14

1.1.2 水产品特定腐败菌14-15

1.1.3 水产品特定腐败菌的分类、鉴定和抑制15-17

1.2 水产品菌相多样性的探讨17-21

1.2.1 Rep-PCR指纹浅析技术18

1.2.2 PCR-DGGE和PCR-TGGE18-20

1.2.2.1 DGGE/TGGE技术的缺陷及优化19-20

1.2.2.2 PCR-DGGE/TGGE的运用20

1.2.3 PCR-RFLP技术20

1.2.4 Biolog微孔板鉴定系统和显色培养基20-21

1.3 本课题探讨目的及作用21-23

第2章 养殖大黄鱼和海水鲈鱼冷藏历程中品质变化与评价23-39

2.1 前言23

2.2 试验材料与主要仪器23-24

2.2.1 试验材料23-24

2.2.2 主要仪器24

2.3 试验策略与步骤24-28

2.3.1 试验材料及其预处理24

2.3.2 感官评价24-26

2.3.3 理化指标26

2.3.3.1 K值测定26

2.3.3.2 挥发性盐基氮(TVB-N)测定26

2.3.3.3 pH测定26

2.3.4 微生物浅析策略26-27

2.3.5 数据处理27-28

2.4 结果与浅析28-37

2.4.1 感官评价28-29

2.4.2 K值29-30

2.4.3 挥发性盐基氮30-31

2.4.4 pH值31-32

2.4.5 细菌总数32-33

2.4.6 产H_2S的菌株33-34

2.4.7 检测单胞菌34

2.4.8 明亮发光杆菌34-36

2.4.9 乳酸菌36

2.4.10 肠杆菌36-37

2.5 本章小结37-39

第3章 PCR-DGGE探讨养殖大黄鱼和海水鲈鱼冷藏历程中细菌菌群变化39-51

3.1 前言39

3.2 试验材料与主要仪器39-40

3.2.1 试验材料39-40

3.2.2 主要仪器40

3.3 实验策略40-44

3.3.1 样品处理40

3.3.2 样品中总基因组DNA的提取40-41

3.3.3 PCR扩增41-43

3.3.3.1 普通PCR引物41

3.3.3.2 普通PCR反应条件41-43

3.3.4 PCR-DGGE电泳43-44

3.3.4.1 丙烯酰胺变性胶配置43

3.3.4.2 变性梯度凝胶电泳(DGGE)43-44

3.3.5 DGGE胶清晰明亮条带的割胶、回收DNA44

3.3.6 数据处理44

3.4 结果与浅析44-50

3.4.1 细菌总DNA的PCR扩增结果44-45

3.4.2 细菌的DGGE图谱浅析45-47

3.4.3 测序结果浅析47-50

3.5 本章小结50-51

第4章 养殖大黄鱼和海水鲈鱼特定腐败菌的分离鉴定51-65

4.1 前言51

4.2 材料与仪器51-52

4.2.1 实验材料51

4.2.2 实验仪器51-52

4.3 实验策略52-55

4.3.1 样品预处理52

4.3.2 特定优势腐败菌的筛选：感官评价52

4.3.3 特定腐败菌的腐败能力的鉴定52-53

4.3.3.1 优势微生物计数浅析52

4.3.3.2 TVB-N的测定52

4.3.3.3 TMA的测定52-53

4.3.4 特定腐败菌的鉴定53-54

4.3.4.1 革兰氏染色53

4.3.4.2 生化鉴定53

4.3.4.3 16SrDNA的鉴定53-54

4.3.5 数据处理54-55

4.4 结果与讨论55-63

4.4.1 优势腐败菌的评价55-56

4.4.2 特定腐败菌的感官评价56

4.4.3 特定腐败菌的腐败能力浅析56-58

4.4.3.1 微生物计数56-57

4.4.3.2 TVB-N57-58

4.4.3.3 TMA58

4.4.4 特定腐败菌的鉴定58-63

4.4.4.1 革兰氏染色58-59

4.4.4.2 生化鉴定59-60

4.4.4.3 PCR检测60-61

4.4.4.4 同源性的比较和系统进化树的建立61-63

4.5 本章小结63-65

第5章 总结、革新点与展望65-67

5.1 总结65-66

5.2 革新点66

5.3 展望66-67