摘要：本论文主要分为四个部分。第一部分以小鼠大脑为浅析样本,建立直接进样电喷雾串联质谱测定鞘磷脂和硫苷脂的浅析策略。第二部分以小鼠大脑为浅析样本,建立流动注射电喷雾串联质谱测定鞘磷脂和硫苷脂的浅析策略。第三部分对直接进样电喷雾串联质谱和流动注射电喷雾串联质谱测定鞘磷脂和硫苷脂的两种浅析策略进行比较。第四部分利用直接进样电喷雾串联质谱法测定了三种动物脑组织(鸡脑、鸭脑、猪脑)中鞘磷脂和硫苷脂含量,探讨了不同储藏温度下猪脑组织中鞘磷脂和硫苷脂的变化；利用流动注射电喷雾串联质谱法探讨了硒对小鼠血浆中鞘磷脂的影响。首先,本论文以小鼠大脑为浅析样本对鞘磷脂和硫苷脂的提取策略、样品的进样速度、鞘磷脂和硫苷脂扫描方式的选择以及串联质谱参数等进行优化,建立直接进样电喷雾串联质谱测定鞘磷脂和硫苷脂的策略,并对该策略的线性联系、提取回收率、日内精密度及日间精密度进行了考察。最终选择改良的Bpgh Dyer法结合氢氧化钠甲醇提取鞘脂,采取流动注射泵直接进样的方式以5μL/min的进样速度将样品导入电喷雾离子源,利用串联三重四级质谱的子找母扫描功能,扫描鞘磷脂和硫苷脂的特点性子离子,实现对鞘磷脂和硫苷脂的源内分离和鉴定。策略学评价显示：在5-2000ng/mL的线性范围内具有良好的线性联系(R2分别为0.9967和0.9913),其精密度(均小于8.72%)和回收率(88.7-107.8%)均符合浅析要求,本策略具有前处理较简单,特异性强,灵敏度高,定性和定量快速准确,策略稳定等特点,可满足生物样品中鞘磷脂和硫苷脂检测的需要。其次,本论文以小鼠大脑为浅析样品,对样品的进样速度、进样量、流动相、串联质谱参数等相关参数进行了选择优化,建立了流动注射电喷雾串联质谱测定鞘磷脂和硫苷脂的策略,并对该策略的线性联系、提取回收率、日内精密度及日间精密度进行了考察。最终,脑组织样品经改良的Bpgh Dyer法结合氢氧化钠甲醇处理后提取鞘脂,在直接进样电喷雾串联质谱定性的基础上,分别以含0.1%甲酸的甲醇溶液和纯甲醇溶液作为流动相将样品采取流动注射泵直接进样的方式以0.15mL/min的进样速度导入电喷雾离子源,利用串联三重四级质谱的多离子反应监测方式扫描,实现对鞘磷脂和硫苷脂源内分离和鉴定。策略学评价显示：在5-2000ng/mL的线性范围内具有良好的线性联系(R2分别为0.9954和0.9972),其精密度(均小于8.21%)和回收率(87.3～103.2%)均符合浅析要求,本策略具有自动化程度高,定性定量准确且策略稳定,前处理较简单,特异性强,浅析速度快等特点,可满足生物样品中鞘磷脂和硫苷脂浅析的需要。再次,本论文对前期建立的两种测定鞘磷脂和硫苷脂的电喷雾串联质谱策略进行比较,发现这两种策略在仪器配备和自动化程度上略有差别,但两者灵敏度和准确性都较高,操作简便,特异性强,由此两种策略都适合浅析生物样本中鞘磷脂和硫苷脂的含量。最后,将两种策略分别运用于实际样品的检测。直接进样电喷雾串联质谱法测定三种动物脑组织(鸡脑、鸭脑、猪脑)中鞘磷脂和硫苷脂的含量中发现,三种动物脑组织鞘磷脂和硫苷脂分子种成分接近,但是相对含量有所差别,同属禽类脑的鸡脑和鸭脑鞘磷脂和硫苷脂分子种相对含量相近,而与属畜类脑的猪脑有所差别,这些差别有望用于不同动物脑组织来源的鉴定。直接进样电喷雾串联质谱法探讨猪脑组织在不同储藏历程(+20℃,+4。C和-20℃温度下分别储藏36h,7d和60d)中,鞘磷脂和硫苷脂含量的变化历程中发现,鞘磷脂和硫苷脂含量基本上呈现逐渐上升,再缓慢减少,最后趋于稳定的走势。+4。C储藏条件下,鞘磷脂和硫苷脂的氧化和水解速度显著慢于+20。C储藏条件。在-20。C储藏条件下在60d的储藏历程中,鞘磷脂和硫苷脂含量基本没有变化,表明鞘磷脂和硫苷脂在低温储藏历程中能够保持长时间的稳定。流动注射电喷雾串联质谱法测定硒对小鼠血浆中鞘磷脂的影响中发现,随着膳食中补充硒的浓度的增加,鞘磷脂的含量呈现递增走势。关键词：鞘磷脂论文硫苷脂论文电喷雾串联质谱论文脑组织论文储藏论文硒论文
摘要3-6
ABSTRACT6-13
第1章 绪论13-21
1.1 鞘脂的结构和生物学功能13-15
1.1.1 简单鞘氨醇类14
1.1.2 神经酰胺(ceramide)14
1.1.3 鞘磷脂(sphingomgepns,)14
1.1.4 鞘糖脂(glycoppids)14-15
1.2 鞘脂探讨进展15-18
1.3 动物脑组织探讨进展18
1.4 硒探讨概况18-19
1.5 本课题的选题背景、探讨作用及探讨内容19-21
1.5.1 选题背景及探讨作用19-20
1.5.2 探讨内容20-21
第2章 直接进样电喷雾串联质谱法测定鞘磷脂和硫苷脂21-37
2.1 材料、试剂与仪器21-22
2.1.1 材料21
2.1.2 试剂21-22
2.1.3 手术器械、实验仪器22
2.2 实验策略22-24
2.2.1 标准液配置22-23
2.2.2 试剂配制23
2.2.3 鞘脂提取23
2.2.4 质谱参数23-24
2.2.5 鞘磷脂和硫苷脂的直接进样电喷雾串联质谱浅析24
2.3 结果与讨论24-35
2.3.1 实验条件的优化24-31
2.3.2 线性联系考察31-32
2.3.3 回收率和精密度32
2.3.4 小鼠大脑中鞘磷脂和硫苷脂情况32-35
2.4 小结35-37
第3章 流动注射电喷雾串联质谱法测定鞘磷脂和硫苷脂37-51
3.1 材料、试剂与仪器37-38
3.1.1 材料37
3.1.2 试剂37-38
3.1.3 手术器械、实验仪器38
3.2 实验策略38-39
3.2.1 标准液配置38
3.2.2 试剂配制38
3.2.3 鞘脂提取38-39
3.2.4 液相参数39
3.2.5 质谱参数39
3.2.6 鞘磷脂和硫苷脂的流动注射电喷雾串联质谱浅析39
3.3 结果与讨论39-50
3.3.1 实验条件的优化39-47
3.3.2 线性联系考察47
3.3.3 回收率和精密度47-48
2.3.4 小鼠大脑中鞘磷脂和硫苷脂情况48-50
3.4 小结50-51
第4章 直接进样和流动注射电喷雾串联质谱法测定鞘磷脂和硫苷脂的策略比较51-57
4.1 策略学验证比较51-52
4.2 结果比较52-55
4.3 质谱浅析策略比较55
4.4 小结55-57
第5章 鞘磷脂和硫苷脂浅析策略的运用57-73
5.1 直接进样电喷雾串联质谱法浅析鞘磷脂和硫苷脂的运用57-66
5.1.1 材料和仪器58-59
5.1.2 实验策略59
5.1.3 结果与讨论59-65
5.1.4 小结65-66
5.2 流动注射电喷雾串联质谱法测定鞘磷脂和硫苷脂的运用66-73
5.2.1 材料和仪器67
5.2.2 实验策略67-68
5.2.3 硒对小鼠鞘磷脂的影响探讨结果与讨论68-71
5.2.4 小结71-73
第6章 总结、革新点和展望73-77
6.1 总结73-74
6.2 革新点74
6.3 探讨展望74-77
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