本站原创
摘要：探讨背景超声造影剂(Ultrasound Contrast Agents, UCAs)是一类能够显著增强医学超声检测信号的诊断药物,是一种含有高浓度微气泡的制剂。包裹气体的微泡制剂具有强烈的超声波散射性能,经静脉注射到达体内各器官微循环后,可使超声回波信号显著增强,组织、器官图像质量显著改善,以而大大提升超声诊断效果。UCAs的出现显著提升了超声诊断的敏感性与特异性,进一步拓展了超声诊断领域,使超声诊断由“平扫时代”进入“增强时代”,被誉为超声诊断领域的第三次革命。更值得注意的是,对于某些诊断而言,它们将是帮助超声有效竞争MRI、CT的关键技术之一。新型UCAs的制备与运用探讨是近年来超声医学探讨的热点与前沿。UCAs的进展经历了以第1代包裹空气的微泡制剂到第2代包裹氟碳类惰性气体的微泡制剂,造影剂在稳定性和有效性方面均取得了突破性的进展。目前,UCAs研制的重要进展方向是成膜材料的改善,目的是使造影剂利用更安全、造影持续时间更长。以UCAs研制的历史看,九十年代初期研制的造影剂多采取人血白蛋白作为成膜材料,九十年代后期开始向脂质材料或多聚体材料方向进展。理由在于,以安全方面考虑,人血白蛋白作为血液制品有着传播血液传播性疾病的可能,安全性不如脂膜造影剂；以造影效果看,脂膜造影剂由大分子脂质构成的脂膜比变性白蛋白形成的膜更稳定、更有弹性,造影效果更好,持续时间更长,更能满足临床的需要。由此,脂质微泡的研发是目前UCAs进展的主流。UCAs市场是一个新兴而蓬勃进展的市场,国外已有的UCAs十分昂贵,由此,在国内研发UCAs具有重要价值。欧美国家已经先后开发出新一代的脂质UCAs,如SonoVue、Definity等,目前UCAs市场均被欧美国家所垄断。国内UCAs的探讨以我科为先导,先后开发出“东冠注射液”、“全氟显”等以白蛋白为外壳的UCAs,其声学活性在许多方面均优于国外同类产品。由于与人血白蛋白UCAs相比,脂质UCAs有着着显著的优势,所以后续开发上市的造影剂都以脂质UCAs为主。由此,本课题组正致力进行新型脂质微泡UCAs的探讨开发工作,以填补国内脂质UCAs市场的空白。目的1对脂质微泡UCAs的处方、制备工艺进行改善、优化,以制备出高浓度、粒径适宜、稳定有效的脂质微泡制剂,为脂质UCAs勺新药研发提供试验依据。2对脂质微泡UCAs的理化性质进行评价,包括其外观形态、浓度、粒径、分布、内含气体全氟丙烷含量测定、耐压稳定性、以及液体制剂贮存稳定性,以初步探讨脂质UCAs的质量标准。3进一步探讨脂质微泡UCAs的动物药效学特性,对其在新西兰大白兔肝和肾的显影效果进行评价。策略1工艺参数及处方优化探讨1.1工艺优化采取高速剪切法制备脂质微泡UCAs,单因素试验浅析脂质微泡的制备工艺参数,包括剪切速度、剪切时全氟丙烷气体通气时间、剪切时间。每个因素分别设不同水平,剪切速度(4档、5档、6档)、剪切时全氟丙烷气体通气时间(15s、30s、45s、60s)、剪切时间(90s、110s、120s、130s、150s),以微泡的浓度、平均粒径为指标,通过方差浅析优选出最佳工艺参数。1.2处方优化采取优选的剪切工艺参数,以混合磷脂为成膜材料,全氟丙烷气体为内核材料制备脂质微泡。磷脂总浓度、DPPE-PEG5000的比例、DPPA的比例以及NaCl浓度是影响脂质微泡浓度及粒径的重要因素,由此,以磷脂总浓度(A)、DPPE-PEG5000匕例(B)、DPPA比例(C)、NaCl用量(D)作为自变量,以脂质微泡的浓度作为因变量,进行正交设计L9(34),筛选出脂质微泡UCAs的最优配方,为脂质UCAs的新药研发提供试验依据。2脂质微泡UCAs的理化特性评价2.1微泡外观形态观察取脂质微泡混悬液滴加于载玻片上,盖上盖玻片,于光学显微镜下观察其外观形态。2.2库尔特计数器检测采取50μm小孔管,0.9%NaCl电解液,浅析体积500μl,粒径测量范围1.1μm～30μm。取微泡混悬液20μl,用生理盐水稀释5000倍,库尔特计数器测定微泡的浓度、平均粒径及其粒径分布。2.3全氟丙烷气体含量测定气相色谱-质谱联用仪测写作剂中全氟丙烷气体的含量。气相色谱条件：色谱柱为DB-5ms(30m×250μm×0.25μm),柱温35℃,载气为氦气,柱流速为0.8ml/min。质谱条件：EI电离源,倍增电压1900ev,选择离子：m/z(质荷比)69、169。样品处理：分别精密吸取2ml微泡溶液,注入装有500ml高纯氮气的采气袋内,于超声破碎仪上水浴超声10min使微泡完全破裂释放出OFP气体。吸取50μl进行气相色谱-质谱检测,外标法算出气体含量。2.4耐压稳定性用5ml注射器抽取4ml脂质微泡混悬液,通过三通管连接eagle4000监护仪,分别持续施加150mmHg、300mmHg压力1min、3min、5min、10min,再用库尔特计数器测量其浓度、粒径及分布。2.5液体制剂贮存稳定性制备脂质微泡6批,于4℃±2℃冰箱保存,分别于第0月,1月、2月、3月、6月取样品用库尔特计数器浅析其浓度、平均粒径及分布,以探讨液体微泡的贮存稳定性。3药效学评价3.1给药剂量选择取新西兰大白兔3只,分别耳缘静脉给药0.005、0.01、0.02、0.06、0.1ml/kg,分别进行肾脏、肝脏超声造影,随机安排各剂量组的给药次序,每个剂量组重复给药测定5次,记录图像数据至造影效果出现显著减退为止。采取仪器自带的浅析软件Q-lab对图像进行浅析。3.2造影效果评价取新西兰大白兔3只,脂质微泡UCAs给药剂量为0.01ml/kg,分别进行肾脏、肝脏超声造影,每个脏器检查重复3次,记录图像数据至造影图像廓清为止。采取仪器自带的浅析软件Q-lab对图像进行浅析。结果1按单因素试验考察脂质微泡制备工艺相关参数,得出全氟丙烷脂质微泡最佳的制备工艺参数为：剪切档数6档,通气时间30s,剪切时间2min。2按正交设计策略进行制剂处方优化实验,得出全氟丙烷脂质微泡最佳制备处方：磷脂总浓度为1×10-3mol/L, DPPE-PEG5000比例为8%,DPPA比例为10%,NaCl用量为4.5mg/ml。3按最优工艺制备的脂质微泡混悬液为白色乳状液,光学显微镜下可见微泡呈透亮球形,分布均匀,彼此无聚集现象。微泡浓度为(2.99±0.19)×109个/ml,平均粒径为(2.46±0.05)μm,97%微泡粒径小于7μm,OFP含量为(387.81±35.28)1μg/ml(每毫升脂质微泡OFP含量)。4微泡的耐压稳定性良好,耐受150mmHg压力后,各时间组浓度并无显著性差别(P=0.051)；耐受300mmHg压力后在5min和10min时与对照组(0min)相比浓度有显著性差别(P0.001),但浓度仍大于2×109个/ml,仍能满足超声显影要求。5对脂质微泡混悬液进行6个月的稳定性考察,贮存于4±2℃冰箱中,在3个月内微泡浓度、平均粒径没有显著性变化(P均0.05)。第6个月时,微泡的浓度和粒径都有所下降,与刚制备时(0月)相比差别显著(P0.001),但浓度仍大于2×109个/ml,平均粒径也仍然满足最佳粒径要求。6药效学实验表明：脂质微泡UCAs最佳给药剂量为0.01ml/kg。脂质微泡给药剂量为0.01ml/kg时,所有实验兔均获得满意的肾脏、肝脏声学图像,造影剂填充均匀,与周围组织分界清晰。脂质微泡肾脏造影时,其峰值减半时间为603±47s,廓清时间为726±6s；肝脏造影时其峰值减半时间为388±97s,廓清时间为718±89s,可以满足临床运用要求。结论1用混合磷脂和全氟丙烷气体作基本原料,经高速剪切分散处理水合磷脂可制备出直径小于7μm、浓度大于2.0×109个/ml、稳定性较好的全氟丙烷脂质微泡。2利用库尔特颗粒浅析仪测定脂质微泡的浓度、粒径及分布,策略简便可靠,是对脂质微泡进行质量制约的主要手段。3脂质微泡中全氟丙烷气体是其超声显影的主要成分,其含量是制剂质控的关键指标。气相色谱—质谱联用法测定全氟丙烷气体含量,具有简便、快速、灵敏、准确、精密度高等优点,可作为全氟丙烷类UCAs的有效质控手段。4低温保存有利于脂质微泡制剂的稳定。5制备的脂质微泡在体外具有良好的耐压能力,提示其在人体血管内运用后将有良好的稳定性,可以达到较好的造影效果。6制备的脂质微泡对新西兰大白兔肾脏、肝脏超声造影图像清晰,显影时间长,提示其在动物运用后具有良好的显影效果。关键词：超声造影剂论文微泡论文磷脂论文全氟丙烷论文气相色谱论文质谱法论文
本论文由{#GetFullDomain},需要查抄袭率论文可以联系人员哦。
本论文由{#GetFullDomain},需要查抄袭率论文可以联系人员哦。
摘要3-8
ABSTRACT8-17
第一章 前言17-24
1 UCAs的探讨开发进展18-20
2 UCAs的临床运用价值20-23
3 立题依据及作用23-24
第二章 全氟丙烷脂质微泡的制备探讨24-36
1 材料24-25
2 策略25-27
3 结果27-32
4 讨论32-36
第三章 脂质微泡超声造影剂的质量评价36-46
1 材料36-37
2 策略37-38
3 结果38-43
4 讨论43-46
第四章 脂质微泡超声造影剂的药效学探讨46-56
1 材料46-47
2 策略47-48
3 结果48-53
4 讨论53-56
全文小结56-58