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试议组织学四川省猪细环病毒分子流行病学调查与其II型致断奶仔猪病理组织学观察

收藏本文 2024-02-07 点赞:30514 浏览:128940 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:Torque teno sus virus (TTSuV)属于新建立的指环病毒科Iotatorquevirus属成员,为一种小二十面体无囊膜单股负链环状DNA病毒,呈全球分布,在家猪和野猪群中感染率较高。本探讨对采自四川省各个不同州市的244份猪血清通过套式PCR (nPCR)扩增非翻译区(UTR)部分片段,测序并进行序列浅析,构建进化树。另外,通过TTSuV1(272bp)、TTSuV2(225bp)和TTSuVs基因组UTR的130bp重叠序列探讨TTSuVs的分子进化。将28日龄SPF猪随机分成两组,实验组21头,对照组3头,利用不含TTSuV1和PCVs基因组而含有TTSuV26.91×107基因组拷贝/mL的肝组织匀浆液,通过肌肉注射人工攻毒实验组,对照组采取同种方式注射1mL无菌DMEM,分别于3、7、10、14、17、21和24dpi剖杀,采集心、肝、脾、肺、肾、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、胰腺、扁桃体、十二指肠用于病理组织学观察。将所有组织在10%中性甲醛溶液中固定24-48h,通过常规操作并包埋在固体石蜡中,将组织切片切成4~5μm厚,并用苏木精-曙红(HE)染色,在显微镜下观察病理组织学变化。流行病学调查显示,TTSuVs两个基因型在不同猪场均有感染。感染TTSuV1或TTSuV2的阳性率为83.20%,共感染阳性率为18.03%,TTSuV2感染阳性率(76.23%)显著高于TTSuV1(25%).另外,测序的TTSuV基因组UTR片段足够成为TTSuV的分子标签。进化浅析显示TTSuVs基因型均可分为两个亚型,且TTSuV1b亚型和TTSuV2两个亚型在四川流行。攻毒实验显示,与对照组相比,实验组均未体现出临床症状。但病理组织学观察显示,实验组心肌纤维和心内膜出血、轻度间质性肺炎、轻度膜性肾小球肾病、肝脏汇管区中度炎症细胞浸润、胰腺小体灶状出血、十二指肠粘膜下层和纵横肌外侧小管有少量红细胞、扁桃体和肺门淋巴结毛细血管有少量红细胞和炎性细胞(淋巴细胞和嗜酸性粒细胞)渗出、淋巴结副皮质区有炎性细胞渗出和淋巴细胞坏死。病理学实验表明TTSuV2能稳定地传染给阴性猪,TTSuV2能引起特点性的组织病理损伤,但在这些实质器官中并没有显著的病理组织学变化,尤其消化器官和免疫器官。TTSuV2并不是猪的常见病原,不能引起特异性的疾病。本探讨为四川省的TTSuV感染情况丰富了其流行病学资料及其致病性探讨的实验数据,有利于监测和探讨猪TTSuV的疫源、进化、致病性特点,为进一步深入探讨病毒形态结构、遗传与变异、基因功能和致病性奠定一定的试验生物学基础。关键词:TTSuV论文亚型论文进化浅析论文分子流行病学论文病理组织学论文

    摘要4-6

    ABSTRACT6-8

    缩略词表8-13

    第一章 TORQUE TENO SUS VIRUS(TTSUV)的探讨进展13-27

    1 TTV和TTSuV的发现13-14

    2 TTV和TTSuV的分类14-16

    3 TTV和TTSuV的病原学特点16-18

    3.1 理化性质16

    3.2 基因组特点及编码蛋白功能16-18

    4 TTSuV的遗传变异18-19

    5 流行病学19

    6 疾病相关性19-21

    7 TTSuV实验室诊断策略21-26

    7.1 TTSuV分子生物学的检测策略21-23

    7.2 TTSuV分型的检测23-24

    7.3 TTSuV的血清学诊断法24

    7.4 病理组织学诊断24-25

    7.5 动物模型的建立25-26

    8 本探讨的目的和作用26-27

    第二章 四川省TTSUVS的分子流行病学调查27-49

    前言27-29

    1 材料和策略29-35

    1.1 菌株和载体29

    1.2 病料来源29

    1.3 主要试剂及溶液配制29-30

    1.3.1 主要试剂29

    1.3.2 溶液的配制29-30

    1.4 主要仪器30-31

    1.5 病毒总DNA的抽提31

    1.6 PCR物设计和合成31-32

    1.7 PCR扩增32

    1.8 PCR扩增产物的回收纯化32-33

    1.9 TTSuV1和TTSuV2部分UTR的克隆33

    1.9.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备33

    1.9.2 PCR产物的连接33

    1.9.3 重组质粒的转化33

    1.10 重组质粒的鉴定33-35

    1.10.1 重组质粒的筛选33-34

    1.10.2 重组质粒的PCR鉴定34

    1.10.3 目的基因的序列测定浅析和序列提交34-35

    1.11 TTSuV部分UTR序列在分子系统学中运用的可能性评价35

    1.12 系统发生数的构建35

    2 结果35-45

    2.1 部分猪场样品TTSuVs的PCR检测结果35-38

    2.2 TTSuV UTR作为分子标记的评价38-40

    2.3 基于TTSuV部分UTR的序列比对和系统进化浅析40-45

    3 讨论45-48

    3.1 引物选择45

    3.2 流行病学45-47

    3.3 基因分型47

    3.4 分子标记UTR47-48

    4 小结48-49

    第三章 TTSUV2型的病理组织学观察49-61

    前言49

    1 材料和策略49-51

    1.1 实验动物49

    1.2 毒株和细胞49-50

    1.3 实验试剂50

    1.4 实验仪器50

    1.5 单一TTSuV2病毒感染因子的获得50-51

    1.5.1 对囊膜病毒的处理50-51

    1.5.2 感染性有囊膜病毒的细胞分离鉴定51

    1.5.3 常见猪病毒核酸的PCR检测51

    1.6 TTSuV2病毒DNA载量的测定51

    1.7 实验设计51

    2 结果51-57

    2.1 病毒载量的测定51-52

    2.2 病理组织学观察52-57

    3 讨论57-60

    3.1 TTSuV2单一感染因子的获得和TTSuV2阴性猪的筛选57-58

    3.2 TTSuV2感染引起的病理损伤58

    3.3 TTSuV在其他相关疾病中的作用58-60

    4 小结60-61

    第四章 结论与革新点61-62

    1 结论61

    1.1 流行病学调查61

    1.2 病理组织学观察61

    2 革新点61-62

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