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摘要：目的：观察高同型半胱氨酸（Hcy）与高糖单独或联合运用对小鼠足细胞凋亡及其PKC活性、podocin mRNA表达的影响，探讨高糖、高同型半胱氨酸对足细胞损伤的作用机制。策略：1.将小鼠足细胞孵育于含50U/mLγ-干扰素，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素，10%(体积分数)胎牛血清的1640培养液中，33℃细胞培养箱中培养传代，然后将细胞转入不含γ-干扰素的10%胎牛血清1640培养液，37℃培养箱中诱导分化10～14d，倒置显微镜下观察细胞形态。2.将分化成熟的足细胞于不含胎牛血清的1640培养液中同步培养24h，随机分为①对照组：正常对照组（5mmol/L葡萄糖）、高渗对照组（5mmol/L葡萄糖+20mmol/L甘露醇）；②损伤组：高Hcy组（1mmol/L的Hcy）、高糖组（25mmol/L葡萄糖）、混合组（1mmol/L的Hcy+25mmol/L葡萄糖）；③PKC抑制剂组：高Hcy+白屈菜红碱（10~(-5)/L）、高糖+白屈菜红碱（10~(-5)/L）、高Hcy+高糖+白屈菜红碱（10~(-5)/L）；各组细胞继续孵育24、48、72h，通过倒置显微镜观察细胞生长状态；分别收集细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡，ELISA法检测各组PKC活性，RT-PCR法检测podocin mRNA表达。结果：1.正常组与高渗组相比，凋亡率、PKC活性及podocin mRNA表达差别均无统计学作用。细胞孵育24h时，各组细胞未见到显著的细胞凋亡，凋亡率差别无统计学作用（P＞0.05）；48h时，高Hcy、高糖、混合组细胞凋亡率分别为（13.42±1.35）%、（12.98±1.02）%、（20.72±0.36）%，较正常组升高（P 0.05），混合组细胞凋亡更加显著（P 0.01）；72h时，上面陈述的3组细胞凋亡较48h更加显著（P 0.05），凋亡率分别为（20.27±1.80）%、（21.49±1.20）%、（27.77±1.81）%；高Hcy组、高糖组和混合组细胞孵育24h时，PKC活性较正常组升高（P 0.05），Podocin mRNA表达相比正常对照组降低（P 0.05），混合组更为显著（P 0.01），随着时间推移，48、72h时，上面陈述的差别更为显著（P 0.05）。2.抑制剂组细胞孵育24h时，各组细胞凋亡率较对应的损伤组，差别无统计学作用（P＞0.05），48h时，高Hcy、高糖、混合组细胞凋亡率分别为（10.10±1.57）%、（10.33±1.98）%、（16.99±2.44）%，较对应的损伤组降低，差别有统计学作用（P 0.05），72h仍有上面陈述的差别；24h时，podocin mRNA表达较对应的损伤组增高（P 0.05），72h仍有上面陈述的差别。结论：1.高Hcy和高糖均可诱导小鼠足细胞凋亡，且具有一定的时效性，二者共同作用较单独作用时更强，高Hcy可加重高糖对足细胞的促凋亡作用；2.高Hcy和高糖可下调podocin mRNA的表达，且二者具有叠加效应，作用呈时间依赖性；3.PKC异常激活参与了高Hcy和高糖对足细胞的促凋亡作用及下调podocinmRNA表达的作用。关键词：肾小球足细胞论文高Hcy论文高葡萄糖论文凋亡论文podocin论文PKC论文
主要缩略词5-6
中文摘要6-8
Abstract8-10
前言10-12
第一章 材料与策略12-21
1.1 主要仪器12
1.2 主要实验试剂12-13
1.3 常用试剂的配制13-14
1.4 足细胞的培养及传代（培养策略参考 Mundel 等[1]）14-15
1.5 分组情况及各环境液的配制15
1.6 ELISA 法测定各组细胞磷酸化蛋白激酶 C15-16
1.7 Annexin V-FITC 法检测细胞凋亡16-17
1.8 逆转录-聚合酶链反应17-20
1.9 统计学处理20-21
第二章 结果21-30
一．光镜下观察细胞形态21
二．ELISA 法测定 PKC 水平21-22
三．流式细胞仪检测细胞凋亡22-24
四．Realtime-PCR 法检测 Podocin mRNA 表达24-27
附图 127-28
附图 228-29
附图 329-30
第三章 讨论30-33
第四章 结论33-34