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摘要：端粒是真核生物线性染色体末端的DNA重复序列和蛋白质形成的复合物,其结构高度保守。端粒酶的发现,解释了在细胞分裂中,DNA序列不会丢失的机制,为探讨端粒与衰老或癌症的联系奠定了论述基础。众多探讨表明,端粒缩短与人体衰老和退行性疾病的发生和进展密切相关。端粒酶敲除鼠是探讨衰老和退行性疾病的经典动物模型。早期探讨表明,限制能量摄入不仅可以延长小鼠寿命,还能延迟癌症、神经退行性疾病、糖尿病以及其他老年相关疾病的发生。另外探讨表明,在年老的小鼠中,哺乳动物的雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达升高。mTOR是体内调节细胞生长、增殖和存活的重要蛋白,能够通过调控细胞内能量代谢来影响干细胞的稳态维持。雷帕霉素可以与胞质蛋白FKBP12相结合,特异性的干扰mTORC1的形成,进而干扰mTORC1的生物活性。为了探讨雷帕霉素对端粒酶敲除鼠的作用,给端粒酶缺失小鼠注射mTORC1的抑制剂雷帕霉素,发现处理组小鼠比对照组的寿命短。我对小鼠的造血干细胞以及小肠隐窝进一步浅析发现,处理组比对照组小鼠的造血干细胞数目有略微增加,小肠干细胞数目减少,小肠干细胞凋亡增加,增殖减少。造血干细胞单克隆浅析发现处理组比对照组的单克隆数目少,表明处理组比对照组的造血干细胞功能弱。根据文献报道,端粒酶敲除可以上调P53对DNA损伤修复的调控。雷帕霉素处理端粒酶与P53双基因敲除鼠,发现处理组与对照组的寿命没有差别。在分子水平上,我们利用蛋白印迹实验检测了端粒酶敲除鼠的mTORC1的下游P70S6K的表达。结果显示,端粒酶敲除鼠的P70S6K表达水平降低。关键词：端粒酶敲除鼠论文mTOR论文造血干细胞论文小肠干细胞论文FACS论文
致谢6-7
摘要7-8
Abstract8-9
目次9-10
1 引言10-14
1.1 探讨领域的国内外近况10-11
1.2 探讨所解决的不足11-13
1.3 探讨的实用价值与论述作用13-14
2 材料与策略14-25
2.1 实验动物的饲养与处理14-15
2.2 试剂、耗材与仪器15-18
2.3 实验策略18-25
3 实验结果25-39
3.1 雷帕霉素对端粒酶敲除鼠的寿命以及各器官比重、形态的影响25-29
3.2 雷帕霉素对端粒酶敲除鼠外周血、骨髓中成熟细胞以及造血干细胞数目、功能的影响29-36
3.3 雷帕霉素对端粒酶敲除鼠小肠隐窝数目、增殖、凋亡的影响36-39
4. 分子机制39-40
4.1 端粒酶与p53双敲鼠的存活曲线39
4.2 端粒酶敲除鼠以及端粒酶/p53双基因敲除鼠的造血干细胞mTOR的活性39-40
5 结论40-41
6 讨论41-43