生长因子塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖与血管新生影响

摘要：目的探讨环氧化物酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖的影响，初步探讨COX-2抑制剂塞来昔布的抗肿瘤作用，为COX-2抑制剂塞来昔布运用于急性白血病的防治提供可靠的实验依据。策略收集2010年2月至2011年7月河南科技大学第一附属医院血液科初诊未治的急性白血病患者16例，Ficoll密度梯度离心法取患者骨髓单个核细胞分离，接种于含体积分数为10％灭活的胎牛血清的RPMI1640培养基中常规培养。用不同浓度(0～100μmol/L)塞来昔布处理细胞，采取MTT法检测塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用，并用倒置显微镜观察细胞形态学转变，采取均数比较及多因素浅析等统计学策略探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖的影响。结果1.塞来昔布对急性白血病原代细胞的生长抑制率以3.48%增加到53.24%，且呈时间和剂量依赖联系(P0.05)，即随着药物作用和时间的延长，细胞生长的抑制率逐渐升高。2.未经处理的急性白血病细胞呈圆形或椭圆形，大小均一，生长旺盛，悬浮成团呈“葡萄样”生长。而经80μmoL/L的塞来昔布与以上细胞共育48h后，可观察到塞来昔布对细胞有显著的毒性作用，细胞体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞中颗粒增加，细胞碎片显著增加。结论塞来昔布对急性白血病原代细胞的生长增殖有显著的抑制作用，且能使急性白血病原代细胞的形态学发生变化，导致细胞变性坏死，最终使白血病细胞死亡。由此，塞来昔布有可能成为治疗白血病的一种新药，但具体的机制有待进一步的探讨。目的为了进一步探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖受到抑制的理由，并探讨血管新生网络调控系统在急性白血病发生进展中的作用。策略收集2010年2月至2011年7月河南科技大学第一附属医院血液科初诊未治的急性白血病患者16例，Ficoll密度梯度离心法取患者骨髓单个核细胞分离，接种于含体积分数为10％灭活的胎牛血清的RPMI1640培养基中常规培养。取对数生长期细胞，分为两组，对照组使塞来昔布最终浓度为0μmol/L，实验组则为80μmol/L，培养48小时后，采取免疫组化法检测急性白血病原代细胞血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子-β(TGF-β)的表达情况。计量资料的均数比较采取t检验、方差浅析、直线相关浅析等统计学策略探讨塞来昔布对急性白血病血管新生调控网络的影响。结果1.对照组(0μmoL/L的塞来昔布)VEGF、bFGF、TGF-β的阳性表达率分别为46.69±7.12、27.19±8.19、79.19±16.23，积分分别为102.63±12.97、56.81±14.91、161.56±36.20，实验组(80μmoL/L的塞来昔布)VEGF、bFGF、TGF-β的阳性表达率分别为36.19±5.99、16.38±5.07、81.05±15.76，积分分别为73.38±11.02、36.31±9.62、165.44±33.77。VEGF、bFGF实验组均显著高于对照组，P＜0.01，差别有统计学作用。TGF-β实验组与对照组比较均无统计学作用，P＞0.05。2.为了探求急性白血病原代细胞VEGF、bFGF、TGF-β之间的表达是否有相关性，进行直线相关浅析结果显示VEGF表达与bFGF、TGF-β均呈正相关(r分别为0.534、0.408，P值均＜0.01)。结论塞来昔布能有效抑制急性白血病原代细胞分泌VEGF、bFGF，且通过相关浅析发现VEGF、bFGF、TGF-β之间具有相关性，说明它们共同参与了白血病血管新生的网络调控系代细胞的生长和增殖，同时针对VEGF、bFGF、TGF-β为靶点进行抗血管新生治疗。由此，本探讨表明塞来昔布能够通过抑制白血病血管新生来抑制白血病原疗有望成为白血病患者新的治疗手段。关键词：急性白血病论文COX-2抑制剂论文塞来昔布论文塞来昔布论文急性白血病论文血管新生论文血管内皮生长因子论文碱性成纤维细胞生长因子论文转化生长因子-β论文

摘要2-4

ABSTRACT4-9

第1章 综述9-17

1.1 血管新生与白血病的联系9

1.2 白血病血管新生调控网络系统9-14

1.2.1 COX-2 与白血病的联系9-10

1.2.2 VEGF 与白血病的联系10-12

1.2.3 bFGF 与白血病的联系12

1.2.4 TGF-β与白血病的联系12-13

1.2.5 COX-2、VEGF、bFGF、TGF-β在白血病血管新生中的相互联系13-14

1.3 COX-2 抑制剂与肿瘤的联系14-16

1.4 结束语和展望16-17

第2章 塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖的影响17-23

2.1 引言17

2.2 对象和材料17-18

2.2.1 探讨对象17

2.2.2 主要实验仪器17-18

2.2.3 主要试剂18

2.3 实验策略18-20

2.3.1 密度梯度离心法分离单个核细胞和原代培养18-19

2.3.2 MTT 比色法检测急性白血病原代细胞的增殖19-20

2.3.3 细胞形态学观察20

2.4 统计学处理策略20

2.5 探讨结果20-21

2.5.1 塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖的抑制作用20-21

2.5.2 塞来昔布作用 48h 后细胞形态学观察21

2.6 讨论21-22

2.7 结论22-23

第3章 塞来昔布对急性白血病原代细胞血管新生的影响23-29

3.1 引言23

3.2 对象和材料23-24

3.2.1 探讨对象23-24

3.2.2 主要实验仪器和试剂24

3.3 实验策略24-25

3.3.1 密度梯度离心法分离单个核细胞和原代培养24

3.3.2 免疫细胞化学法检测 VEGF、bFGF、TGF-β的表达24-25

3.4 统计学浅析25

3.5 结果25-26

3.5.1 VEGF 在急性白血病原代细胞培养 48h 后的表达25

3.5.2 bFGF 在急性白血病原代细胞培养 48h 后的表达25-26

3.5.3 TGF-β在急性白血病原代细胞培养 48h 后的表达26

3.6 讨论26-28

3.7 结论28-29