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摘要：目的：探讨大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)无血清上清液体外诱导脐血间充质干细胞(human umbipcal cord blood mesenchymal stem cells, HUCB-MSCs)向神经细胞分化的可行性和可能的机制,以及检测诱导分化后神经元细胞的电生理特性。策略：以新生大鼠嗅球分离、提取OECs,采取差速贴壁联合阿糖胞苷抑制法纯化嗅鞘细胞,在细胞最佳状态下无血清培养24h后收集上清液。收集正常足月剖腹产胎儿的脐带血,经肝素抗凝,用密度梯度离心法分离获得脐血的单个核细胞,采取差速贴壁法纯化间充质干细胞,培养、扩增到第3代,记作脐血MSCsP3。实验分为实验组和对照组,DMEM液体中加入OECs无血清上清液培养脐血MSCsP3作为实验组,用DMEM液体培养脐血MSCsP3作为对照组。在一系列时间点(培养后12小时,24小时,72小时,1周,10天和2周)在倒置显微镜下形态学观察生长、分化情况,1周后行免疫组化鉴定,神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin)分别鉴定神经元、神经胶质细胞和神经干细胞,膜片钳检测神经元电生理特性。结果：用差速贴壁和阿糖胞苷抑制法可获得纯度高达95%的嗅鞘细胞,实验组细胞在培养诱导后相差显微镜下可观察到典型神经元、神经胶质细胞和神经干细胞团,2周后细胞仍维持神经细胞样形态,NSE、GFAP、nestin细胞免疫组化鉴定与形态学结果一致。HUCB-MSCsP3诱导分化后的神经元样细胞检测到快速激活快速失活、能被河豚毒素(TTX)特异性阻断的钠离子电流,能被四乙基氯化铵(TEA)特异性阻断的慢激活慢失活的延迟整流性钾电流,以及缓慢的内向钙离子电流。对照组脐血MSCs培养后呈多形态方向分化。结论：①OECs无血清上清液能诱导脐血MSCs向神经细胞分化;②诱导分化后的神经元具备成熟神经元的电生理特性。关键词：嗅鞘细胞论文脐血间充质干细胞论文电生理特性论文神经细胞论文
中文摘要3-5
英文摘要5-9
引言9-11
第一章 材料和策略11-21
1.1 实验动物11
1.2 手术器械11
1.3 主要实验仪器11-12
1.4 主要试剂12-13
1.5 鼠嗅鞘细胞的培养13-15
1.6 嗅鞘细胞无血清上清液的收集15-16
1.7 脐血间充质干细胞的培养、纯化和扩增16-18
1.8 实验分组18
1.9 免疫组化鉴定18-19
1.10 膜片钳检测19-20
1.11 统计学浅析20-21
第二章 结果21-33
2.1 嗅鞘细胞的培养和鉴定21-23
2.2 脐血间充质干细胞的培养和形态学观察23-24
2.3 脐血间充质干细胞的分组培养24-28
2.4 电生理特性检测结果28-33
第三章 讨论33-37
结论37-39