论地龙地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NFκB影响

摘要：目的：通过动物实验观察地龙组分丝氨酸蛋白水解酶对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠p38MAPK信号通路及核转录因子κB的影响探讨地龙组分丝氨酸蛋白水解酶抗肾间质纤维化的作用机制策略：采取大鼠单侧输尿管梗阻法复制肾间质纤维化模型。将健康雄性Wistar大鼠60只,随机分组：检测手术组12只,模型组16只,地龙低剂量组16只,地龙高剂量组16只。地龙低剂量组给-予地龙组分丝氨酸蛋白水解酶胶囊0.24g·kg1-·d-1灌胃；地龙高剂量组给予地龙组分丝氨酸蛋白水解酶胶囊0.48g·kg-1·d-1灌胃；检测手术组和模型组给等量蒸馏水灌胃。分别于术后第2W、4W处死各组的6只大鼠,处死前一天收集24h尿量检测24h尿蛋白定量,处死当天收集静脉血用于血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)指标的检测。取梗阻侧肾组织标本,HE染色后光镜下观察肾脏病理转变；免疫组织化学策略检测肾组织中TGF-β1、a-A、Col-Ⅳ的表达；Western blot检测肾组织中NF-κB、p38MAPK的蛋白表达结果：(1)以外观上看,与模型组相比,地龙治疗组在对应时间点上梗阻侧肾脏的肿大及积水程度较轻,色泽较红润。(2)在不同的时间点各组大鼠24h尿蛋白定量无统计学差别(P0.05)。(3)地龙治疗组大鼠的Scr、BUN水平在第2、4W时均低于模型组(p0.05或p0.01)；相同时间点,地龙低剂量组大鼠血清Scr、 BUN水平低于地龙高剂量组。(4)免疫组化结果显示：模型组及地龙治疗组大鼠肾组织中TGF-β1、a-A、Col-Ⅳ的表达随梗阻时间的延长,逐渐增加；在对应的时间点,地龙高、低剂量组与模型组大鼠相比,TGF-β1、 a-A、Col-Ⅳ的蛋白表达显著降低(p0.05或p0.01)。(5)Western blot结果显示：随着梗阻时间的延长,模型组及地龙治疗组NF-κB、p38MAPK的表达逐渐增加,地龙治疗组NF-κB、p38MAPK的表达显著低于对应时间点模型组(p0.05)。(6)实验观察到地龙低剂量组疗效优于高剂量组结论：(1)地龙组分能够降低UUO模型大鼠的血清Scr、BUN水平具有保护肾功能作用。(2)地龙组分能够转变肾脏组织形态、减轻肾间质纤维化程度,具有减轻UUO大鼠肾组织损伤作用(3)地龙组分可能是通过下调α-A和Col-Ⅳ的表达来抑制成纤维细胞过度活化,减少ECM的过度积聚,来延缓肾间质纤维化的进展(4)地龙组分可能是通过多靶点阻断TGF-β1→p3MAPK→NF-κB信号传导通路,来实现其延缓肾间质纤维化进程的作用关键词：地龙组分论文肾间质纤维化论文p38MAPK论文NF-κB论文

缩略语表5-6

中文摘要6-8

ABSTRACT8-11

引言11-13

文献综述13-37

1 中医学探讨进展13-26

1.1 肾间质纤维化中医病名探讨13-15

1.2 肾间质纤维化病因病机探讨15-19

1.3 肾间质纤维化治疗的探讨进展19-26

2 现代医学探讨进展26-37

2.1 肾间质纤维化的概念26

2.2 肾间质纤维化的病因26-27

2.3 肾间质纤维化的发生机制27-30

2.4 肾间质纤维化的治疗30-31

2.5 p38MAPK与肾间质纤维化31-33

2.6 NF-κB与肾间质纤维化33-37

实验一 地龙组分对UUO大鼠血清肌酐、尿素氮及24h尿蛋白定量影响的实验探讨37-42

1 实验材料37

1.1 实验动物37

1.2 主要药物和试剂37

1.3 主要仪器37

2 实验策略37-38

2.1 实验分组37

2.2 UUO大鼠模型的制备37-38

2.3 给药策略38

2.4 标本收集38

2.5 指标检测38

3 统计学处理38

4 实验结果38-42

4.1 各组大鼠24h尿蛋白定量的变化39

4.2 各组大鼠肌酐的变化39-40

4.3 各组大鼠尿素氮的变化40-42

实验二 地龙组分对UUO大鼠肾脏组织形态、免疫组化影响的实验探讨42-49

1 实验材料42

1.1 实验动物42

1.2 药物及试剂42

1.3 主要仪器42

2 实验策略42-44

2.1 主要溶液配制42-43

2.2 常规病理检查策略43

2.3 免疫组织化学检查43-44

2.4 结果浅析策略44

3 统计学处理44

4 实验结果44-49

4.1 肾脏组织病理转变44-45

4.2 肾脏组织TGF-β1的表达45-46

4.3 肾脏组织a-A的表达46-47

4.4 肾脏组织Col-Ⅳ的表达47-49

实验三 地龙组分对UUO大鼠肾脏NF-κB和p38MAPK #45蛋白表达影响的实验探讨49-57

1实验材料49-50

1.1 实验动物49

1.2 药物及试剂49

1.3 主要仪器49-50

2 实验策略50-52

2.1 主要溶液配制50-51

2.2 样品的处理51

2.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶电泳51-52

2.4 蛋白质的转印52

2.5 蛋白免疫印迹52

3 统计学处理52

4 实验结果52-57

4.1 肾脏组织NF-κB蛋白表达53-54

4.2 肾脏组织p38MAPK蛋白表达54-57

讨论57-70

1 肾间质纤维化动物模型的选择依据57-59

2 对选取指标的说明59-62

3 地龙药物选取依据62-64

4 地龙组分的作用机理探讨64-69

5 探讨中的不足与展望69-70

结论70-71

致谢71-72