酵母代谢木糖产乙醇重组质粒构建

摘要8-9

Abstract9-11

1 前言11-24

1.1 自然界中木糖发酵微生物的种类11-13

1.2 微生物的木糖代谢途径13-16

1.3 构建代谢木糖的重组酿酒酵母16-21

1.3.1 引入木糖还原酶和木糖醇脱氢酶的代谢途径17-19

1.3.2 引入木糖异构酶的代谢途径19-20

1.3.3 原生质体融合的方法构建发酵木糖的酵母工程菌20-21

1.4 提高重组酿酒酵母发酵木糖产乙醇的能力21-23

1.5 本研究的目的和23-24

2 与方法24-55

2.1 24-27

2.1.1 菌种与质粒24

2.1.2 引物24-25

2.1.3 主要试剂25

2.1.4 常用培养基、溶液25-26

2.1.5 主要仪器26-27

2.2 实验方法27-55

2.2.1 酵母总DNA的提取27-28

2.2.2 Candida shehatae木糖还原酶基因克隆28-30

2.2.3 Candida tropicaps木糖醇脱氢酶基因克隆30-32

2.2.4 Saccharomyces cerevisiae木酮糖激酶基因克隆32-34

2.2.5 乙醇脱氢酶启动子、终止子基因克隆34-36

2.2.6 木糖还原酶与乙醇脱氢酶启动子、终止子重组36-38

2.2.7 木酮糖激酶基因与乙醇脱氢酶启动子、终止子重组38

2.2.8 质粒pMA91-xyl2的构建38-42

2.2.9 质粒YIp5-xyl1的构建42-46

2.2.10 质粒YIp5-xyl1-xks1的构建46-50

2.2.11 质粒YIp5-3的构建50-55

3 结果与分析55-70

3.1 木糖代谢关键酶基因克隆55-56

3.2 质粒T-xyl1、T-xyl2和T-xks1构建及测序56-58

3.3 乙醇脱氢酶启动子、终止子基因克隆58-59

3.4 质粒T-ADHp和T-ADHt构建及测序59

3.5 木糖还原酶与乙醇脱氢酶启动子、终止子重组59-60

3.6 木酮糖激酶基因与乙醇脱氢酶启动子、终止子重组60-61

3.7 质粒pMA91-xyl2的构建61-63

3.8 质粒YIp5-xyl1的构建63-65

3.9 质粒YIp5-xyl1-xks1的构建65-67

3.10 质粒YIp5-3的构建67-70

4 与展望70-72

4.1 70

4.2 后续工作展望70-72