摘要：黄精叶钩吻属(Croomia Torrey)植物,为百部科(Stemonaceae)多年生草本,花部4基数,属单子叶植物网状脉类群。该属植物目前共有3种,其中的C. japonica分布在我国的东南部及日本诸岛；C. heterosepala为日本特有；C. pauciflora分布于美国。该属植物的总体分布呈古老的东亚-北美间断分布,具体在亚洲又呈现为中国大陆-日本岛屿的分布格局。选择黄精叶钩吻属植物作为探讨对象不仅可以对该属植物的群体遗传结构及遗传多样性进行检测,还可以对揭示东亚与北美植物区系间联系及物种分化形成机制、探讨岛屿植物的演化及其与大陆植物间的联系等植物地理学不足提供一定的依据。本探讨通过SSR分子标记和单拷贝核基因Agtl序列探讨了黄精叶钩吻属植物各野生群体的遗传多样性分布格局和种间联系,并对该属植物的演化、形成历史及可能的冰期避难所进行了推测；同时提出了该属植物的保护对策。主要探讨结果如下：1、SSR引物开发及浅析本探讨首次在对黄精叶钩吻属的探讨中运用了双重抑制PCR技术,并以C. japonica中分离得到了6对多态性高、特异性好、扩增稳定、重复性高的核微卫星引物。这些引物经通用性检测证实均可在黄精叶钩吻属内3个种中通用,可以运用于Croomia属的遗传多样性、群体遗传结构等群体遗传学探讨。2、黄精叶钩吻属中Agtl单拷贝核基因的序列浅析黄精叶钩吻属Agtl基因单倍型丰富,18个居群共检测到22种单倍型,其中C. japonica14种,C. heterosepala6种,C. pauciflora2种。通过对Agt1基因单倍型的联系和分布的探讨,可以推测出以下结论：中国的天目山一带可能是Croomia属植物的分布及起源中心：在欧亚古大陆和北美古大陆分离以前黄精叶钩吻属植物曾经有着非常广泛的分布；东亚种群与北美种群分歧的时间较早,使得两者之间的亲缘联系较远：东亚2个种之间则分化较晚,使得两者的亲缘联系较近。岛屿地形及冰川期避难所造成的时间及空间的隔离,使得Croomia属各居群之间的分化加大,这一点在日本各岛屿上体现的尤其显著,并使Croomia属在日本岛屿上衍生出两个种。根据Agt1基因单倍型网络图可以得出,C. japonic a是祖先种,并由它衍生出了日本的C. heterosepala和北美的C. pauciflora; C.japonica种内各居群间的分化很大,其中琉球居群与C. pauciflora的联系较近,而中国居群与C.heterosepala联系较近；C. heterosepala分化为两个谱系,表明该种可能为并系起源。根据Agt1基因单倍型分布及网状联系推测,黄精叶钩吻属植物可能有着多个冰期避难所,C. japonica在中国的冰期避难所应该在天目山一带,而北美大陆C. pauciflora的冰期避难所应位于佛罗里达半岛。3、Croomia属植物的保护对策天目山附近的种群遗传多样性最为丰富,且可能是Croomia属植物的演化中心,为最优先保护种群,必须重点保护。每一个Croomia东亚群体都应当尽量保护；如果条件不许可必须迁地保护或进行种质资源收集时要尽量收集齐所有群体的样品,而不是个别群体采集大量个体。关键词：黄精叶钩吻属论文微卫星论文单拷贝核基因论文Agt1论文
摘要3-5
ABSTRACT5-9
第1章 引言9-21
1.1 黄精叶钩吻属探讨综述9-13
1.1.1 黄精叶钩吻属的分布9-10
1.1.2 黄精叶钩吻属与百部科其他属的联系10-11
1.1.3 黄精叶钩吻属植物的生物学特点11-12
1.1.4 黄精叶钩吻属的探讨历史及近况12-13
1.2 亲缘地理学13-19
1.2.1 亲缘地理学介绍13-14
1.2.2 亲缘地理学的相关论述14-16
1.2.3 亲缘地理学探讨中的分子标记16-18
1.2.4 亲缘地理学探讨的主要不足18-19
1.3 本探讨的目的及作用19-21
1.3.1 探讨的目的19
1.3.2 探讨的作用19-21
第2章 黄精叶钩吻属的野外调查和取样21-24
2.1 野外调查及取样策略21
2.2 野外调查及取样结果21-24
第3章 SSR引物开发及浅析24-47
3.1 SSR引物开发24-42
3.1.1 实验材料25
3.1.2 仪器、试剂及其来源25-26
3.1.3 实验策略26-32
3.1.4 微卫星引物的设计及检测32-35
3.1.5 实验结果35-41
3.1.6 讨论41-42
3.2 基于SSR标记的黄精叶钩吻属群体遗传学浅析42-47
3.2.1 实验材料42
3.2.2 实验策略42-43
3.2.3 SSR数据浅析43
3.2.4 实验结果43-45
3.2.5 讨论45-47
第4章 单拷贝核基因引物筛选及序列浅析47-60
4.1 实验材料、试剂及仪器47-48
4.1.1 实验材料47
4.1.2 实验试剂及仪器47-48
4.2 实验策略48-51
4.2.1 基因组总DNA的提取48
4.2.2 单拷贝核基因引物的筛选48-50
4.2.3 Agt1基因的扩增50-51
4.3 数据处理、浅析51-52
4.3.1 DNA序列浅析51
4.3.2 单倍型浅析51-52
4.3.3 构建单倍型系统发育树52
4.4 实验结果52-59
4.4.1 单拷贝核基因Agt1的扩增及测序结果52-56
4.4.2 单倍型谱系联系浅析56-59
4.5 讨论59-60
第5章 结论与展望60-62
5.1 结论60-61
5.1.1 Croomia属nSSR引物开发及浅析60
5.1.2 Croomia属的亲缘地理学60-61
5.1.3 Croomia属植物的保护对策61
5.2 展望61-62
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