本站原创摘要3-4
Abstract4-9
第一章 绪论9-14
1.1 酰胺酶概述9-10
1.1.1 酰胺酶的来源、分类及运用9-10
1.1.2 聚酰胺酶的探讨进展10
1.2 PA纤维的改性策略10-12
1.2.1 物理表面改性11
1.2.2 化学表面改性11
1.2.3 生物酶表面改性11-12
1.3 本课题的主要探讨目的和作用12
1.4 本课题的主要探讨内容12-14
第二章 实验材料与策略14-25
2.1 材料14-15
2.1.1 菌种与质粒14
2.1.2 主要试剂14
2.1.3 主要仪器14-15
2.1.4 培养基15
2.2 策略15-20
2.2.1 己二酸二己基酰胺的合成15
2.2.2 N.farcinica和C.nitrilophilus的培养15-16
2.2.3 PA纤维表面改性处理16
2.2.3.1 PA纤维的预处理16
2.2.3.2 PA纤维的酶处理、碱处理、灭活酶处理16
2.2.3.3 PA纤维的后处理16
2.2.4 Nocarida farcinica总DNA的提取16
2.2.5 聚酰胺酶基因的PCR扩增16-17
2.2.6 琼脂糖凝胶核酸电泳17
2.2.7 胶回收PCR产物17
2.2.8 E.cop感受态细胞的制备17-18
2.2.9 E.cop感受态细胞的热激转化18
2.2.10 质粒DNA的提取18-19
2.2.11 目的基因与表达载体的连接19
2.2.12 聚酰胺酶基因的诱导表达19
2.2.13 聚酰胺酶的定点突变19-20
2.2.14 重组菌pT7-7-AMID-BL21(DE3)的培养与表达20
2.3 浅析策略20-25
2.3.1 E.cop生长量的测定20
2.3.2 蛋白质浓度的测定20
2.3.3 酰胺酶酶活的测定20-21
2.3.3.1 标准曲线的绘制20-21
2.3.3.2 重组聚酰胺酶酶活的测定21
2.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）浅析21
2.3.5 重组聚酰胺酶的纯化21-22
2.3.6 聚酰胺酶的最适温度和热稳定性浅析22
2.3.7 聚酰胺酶的最适pH和pH稳定性浅析22
2.3.8 金属离子对重组聚酰胺酶酶活的影响22
2.3.9 聚酰胺酶底物特异性浅析22-23
2.3.10 重组聚酰胺酶的动力学浅析23
2.3.11 PA酶处理最优条件的探讨23
2.3.12 PA水解产物的检测23-24
2.3.12.1 PA处理液的浓缩24
2.3.12.2 水解产物的检测24
2.2.13 PA酶改性效果的测定24
2.3.14 聚酰胺酶空间结构模拟及浅析24-25
第三章 结果与讨论25-43
3.1 聚酰胺酶对PA纤维的改性效果的初步确定25-26
3.1.1 polyamidase和Cnamidase的制备25
3.1.2 PA改性效果浅析25-26
3.2 聚酰胺酶在E.cop中的克隆表达26-29
3.2.1 N.farcinica基因组DNA的提取26
3.2.2 N.farcinica聚酰胺酶基因的克隆表达26-29
3.2.3 聚酰胺酶基因的诱导表达29
3.3 重组聚酰胺酶酶学性质探讨29-34
3.3.1 重组聚酰胺酶的纯化30
3.3.2 重组聚酰胺酶的最适温度及其稳定性30-31
3.3.3 重组聚酰胺酶的最适pH及其稳定性31-32
3.3.4 金属离子对聚酰胺酶酶活的影响32-33
3.3.5 重组聚酰胺酶的底物特异性浅析33-34
3.3.6 重组聚酰胺酶的动力学浅析34
3.4 重组聚酰胺酶对PA表面改性效果的探讨34-41
3.4.1 重组聚酰胺酶对PA改性效果及水解产物浅析34-36
3.4.1.1 S173A突变体的克隆表达34
3.4.1.2 不同改性处理对PA改性效果浅析34-36
3.4.1.3 Hplc检测PA的水解液36
3.4.2 PA表面酶改性最优条件的确定36-39
3.4.2.1 温度对PA酶改性效果的影响36-37
3.4.2.2 pH对PA酶改性效果的影响37-38
3.4.2.3 酶处理时间对PA酶改性效果的影响38
3.4.2.4 摇床转速对PA酶改性效果的影响38-39
3.4.5 聚酰胺酶水解PA的机制探讨39-41
3.5 提升重组酰胺酶可溶性表达的探讨41-43
第四章 结论与展望43-45
4.1 结论43-44
4.2 展望44-45
致谢45-47