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摘要：目的：探讨腺病毒载体介导的双基因共表达（Ad-ING4-O）对鼻咽癌CNE-2细胞体外抑制作用及机制。策略：将基因重组腺病毒载体反复感染HEK293t细胞，经反复扩增取病毒上清冷冻备用；利用不同剂量携带有绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体（Ad-GFP）感染鼻咽癌CNE-2细胞确定最佳感染复数(MOI)；RT-PCR检测外源性ING4和O基因的转录；PI单染流式细胞仪（FCM）检测各实验组鼻咽癌CNE-2细胞凋亡效应；MTT检测各实验组鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制效应；Hoechst33285核染色观察各实验组鼻咽癌CNE-2细胞凋亡核形态学转变；RT-PCR检测浅析鼻咽癌CNE-2细胞的细胞周期和凋亡相关基因P53、P27、P21、Survivin的表达。结果：经反复感染HEK293t细胞后，获得病毒滴度约为1.3~2.7×109pfu/ml；腺病毒载体（Ad-GFP）感染鼻咽癌CNE-2细胞最佳感染复数为100MOI；RT-PCR检测确定腺病毒介导的ING4和O基因可在鼻咽癌CNE-2细胞中转录，且在对照组和空白组未检测出内源性ING4和O基因转录；PI单染流式细胞仪（FCM）检测鼻咽癌CNE-2细胞凋亡效应，双基因共表达（Ad-ING4-O）组显著显著高于单基因Ad-ING4组和Ad-O组（P＜0.05），单基因组之间无显著差别，但优于空白组和空病毒组(P＜0.05)，空白组和空病毒组间无统计学作用(P0.05)；MTT检测发现双基因共表达（Ad-ING4-O）组鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制效应显著优于单基因ING4组和O组（P＜0.05），单基因组之间无显著差别(p0.05)，但优于空白组和空病毒组(P＜0.05)；Hoechst33285核染色观察到双基因共表达（Ad-ING4-O）组鼻咽癌CNE-2细胞中细胞核和细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光及显著核形态变化；RT-PCR检测浅析显示Ad-ING4-O双基因共表达可显著上调P53、P27、P21和下调Survivin等细胞周期和凋亡相关基因表达。结论：1、与单基因相比AD-ING4-O双基因共表达可在体外显著抑制鼻咽癌CNE-2细胞生长，推动凋亡，具有抑瘤增效作用，其作用机制可能是上调了P53、P27、P21和下调Survivin等细胞周期和凋亡相关基因的表达。2、腺病毒可作为鼻咽癌基因治疗的安全有效的载体。关键词：ING4论文O论文鼻咽癌论文基因治疗论文腺病毒论文
中文摘要5-6
英文摘要6-8
前言8-12
1. 材料与策略12-18
1.1 材料12-14
1.2 策略14-18
1.3 数据浅析处理18
2. 结果18-23
2.1 基因重组复制缺陷型腺病毒载体的扩增及效价的测定18
2.2 基因重组复制缺陷型腺病毒对鼻咽癌CNE-2细胞感染效率的测定18
2.3 RT-PCR鉴定外源性ING4和/或O基因转录18-19
2.4 PI单染FCM检测各组鼻咽癌CNE-2细胞凋亡率的测定19-20
2.5 MTT检测各组鼻咽癌CNE-2细胞生长的抑制作用20-21
2.6 Hoechst33258荧光染色观察各组重组病毒诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡21
2.7 半定量RT-PCR浅析P27、P53 、 P21、Survivin基因表达变化21-23
3. 讨论23-29
结论29-30