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摘要：在食品安全事故频发的今天，食品安全不足更加受到人们的关注，同时也对食品安全检测技术提出了更高的要求。氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作为一种广谱抗生素，因其价廉高效，曾作为药物运用于人和动物细菌性疾病的治疗，并作为饲料添加剂广泛运用于畜牧业、水产业。现已证明，氯霉素对机体有很大的毒副作用，由此世界上许多国家明令禁止将此药用于可食用性动物。欧盟对氯霉素的检测限由原来的10μg/kg降至0.1μg/kg，比原标准要求提升了100倍；美国FDA规定的检出限也由原来的5μg/kg降为了0.3μg/kg。为了严格监控氯霉素的利用，抑制氯霉素引起的食品安全不足的发生，建立高效、灵敏、经济的氯霉素残留浅析策略很有必要。磁性免疫层析法（magnetic lateral flow immunoassays，MLFIAs）作为快速检测策略的新秀，以超顺磁性微球代替传统的胶体金作为信号标记物，即可以通过肉眼观察或光学比色法实现快速定性浅析，又可以进一步利用超顺磁材料特殊的磁信号实现免疫层析技术的定量化检测。本论文考查了几种不同来源的超顺磁性纳米微球，筛选了适用于免疫层析浅析的磁球，探讨优化了磁性免疫层析条件，建立了一种将免疫磁分离与免疫磁层析相结合的磁性免疫层析快速检测新策略，并将其用于氯霉素残留的快速检测。主要探讨内容包括：1)筛选出适合进行磁性免疫层析的磁性纳米粒：主要对8种不同来源超顺磁性微球的性能进行了比较，选择出了适合进行磁性免疫层析的磁球A和磁球D。2)优化了磁微粒免疫层析条件：比较了磁球A和磁球D在不同盐浓度和pH下的性能差别。探讨了不同上样缓冲液配方对磁球展层的影响，发现表面活性剂和高浓度蛋白对于磁球的展层具有显著推动作用，磁球A在0.05%以上的Tween20中就可以完全展层，在5%以上的BSA中就可以部分展层，后利用含5%BSA和1%Tween20的0.01M PBS作为上样缓冲液。探讨了干燥对磁球展层的影响，发现干燥后的磁球更趋向于团聚。由于磁球D同小鼠IgG的偶联物，会发生团聚而影响展层，故最终选用磁球A开展氯霉素残留检测策略探讨。3)建立了氯霉素残留的磁性免疫层析检测新策略：以磁球与抗氯霉素单抗的偶联条件，T点、C点的包被条件，及免疫磁分离技术用于样品处理等条件，对氯霉素的检测进行了优化。选择CB作为包被缓冲液，C点的GAM最佳包被浓度为1:100倍稀释，T点为1:5倍稀释。磁球：mAbCAP最佳偶联比为100:1。100:1的偶联比与25:1的比较，CAP检测限由10ng/mL降低到了4ng/mL以下。建立了利用磁分离的策略处理大体积样品的策略。本探讨建立了一种将免疫磁分离与免疫磁层析相结合的磁性免疫层析快速检测新策略，利用氯霉素作为检测对象，并与本课题组自制的光学成像浅析仪相结合，实现氯霉素残留的快速半定量检测。这些探讨工作也将为今后进展免疫层析磁颗粒的磁信号定量检测奠定基础。关键词：磁性纳米粒论文免疫层析论文氯霉素论文快速检测论文食品安全论文
摘要4-6
Abstract6-11
1. 绪论11-19
1.1 免疫层析技术11-13
1.2 磁微粒免疫浅析技术13-17
1.3 氯霉素残留的危害及检测策略17-18
1.4 本探讨的目的与作用18-19
2. 免疫层析磁球的筛选19-31
2.1 仪器试剂19-21
2.2 实验策略21-24
2.3 结果与讨论24-29
2.4 本章小结29-31
3. 磁性免疫层析条件优化31-43
3.1 仪器试剂32-33
3.2 实验策略33-34
3.3 结果与讨论34-42
3.4 本章小结42-43
4. 磁性免疫层析法检测氯霉素残留43-53
4.1 仪器试剂43-44
4.2 实验策略44-46
4.3 结果与讨论46-52
4.4 本章小结52-53
5. 全文总结与展望53-55
致谢55-57