摘要3-7
ABSTRACT7-19
第一章 综述19-46
1 高密度脂蛋白19-30
1.1 脂蛋白19-22
1.1.1 脂蛋白的分类19-20
1.1.2 脂蛋白的结构20-21
1.1.3 脂蛋白的代谢21-22
1.2 高密度脂蛋白的结构与功能22-27
1.2.1 新生的盘状 HDL 的形成25-26
1.2.2 球形 HDL 的形成26
1.2.3 HDL 中胆固醇的摄取26-27
1.3 HDL 作为输送载体的运用27-30
1.3.1 抗癌药物的载体27-28
1.3.2 抗病物的载体28
1.3.3 抗真菌药物的载体28
1.3.4 医学影像造影剂的载体28-29
1.3.5 基因输送的载体29-30
2 磁共振成像(MRI)30-44
2.1 MRI 的原理30
2.2 MRI 造影剂30-31
2.3 造影剂的分类31-32
2.3.1 顺磁性造影剂32
2.3.2 超顺磁性造影剂32
2.4 MRI 造影剂的体内分布和运用32-44
2.4.1 细胞外液造影剂33-34
2.4.2 血池造影剂34-36
2.4.2.1 白蛋白结合的钆螯合物34
2.4.2.2 连接钆螯合物的高聚物34-36
2.4.2.3 超小超顺磁氧化铁36
2.4.3 靶向造影剂36-44
2.4.3.1 肝胆靶向的造影剂36-37
2.4.3.2 单核吞噬细胞系统的靶向造影剂37-38
2.4.3.3 靶向淋巴结的造影剂38
2.4.3.4 靶向脑部的造影剂38-39
2.4.3.5 主动靶向或细胞标记的造影剂39-41
2.4.3.6 生物激活造影剂41-44
2.4.3.6.1 pH 敏感的造影剂41
2.4.3.6.2 酶敏感的造影剂41-43
2.4.3.6.3 金属离子敏感的造影剂43-44
3 探讨目的与内容44-46
第二章 重组载脂蛋白 A-I 的表达和 GD-DTPA 衍生物的合成46-79
1 前言46-49
1.1 重组载脂蛋白 A-I 的表达46-47
1.2 DTPA 配体的连接反应47-49
1.3 胆固醇的连接反应49
2 材料与策略49-63
2.1 材料与仪器49-53
2.1.1 实验试剂49-50
2.1.2 实验溶液50-51
2.1.3 实验仪器51-53
2.2 实验策略53-63
2.2.1 载脂蛋白 A-I 的表达纯化和鉴定53-58
2.2.1.1 pNFXex 质粒的转化和保存53-54
2.2.1.1.1 感受态细胞的制备53
2.2.1.1.2 pNFXex 质粒的转化、鉴定与保存53-54
2.2.1.2 载脂蛋白 A-I 的表达54
2.2.1.3 载脂蛋白 A-I 的纯化54-55
2.2.1.4 载脂蛋白 A-I 的鉴定55-57
2.2.1.5 载脂蛋白 A-I 的活性检测57
2.2.1.6 载脂蛋白 A-I 的圆二色谱浅析57-58
2.2.2 Gd-DTPA 衍生物 Gd-DTPA-chol 和 Gd-DTPA-(chol)_2的合成58-63
2.2.2.1 胆固醇-乙二胺的合成58-59
2.2.2.2 连接胆固醇的 DTPA 配体 DTPA- chol 和 DTPA-(chol)2的合成59-60
2.2.2.3 Gd-DTPA-chol 的合成60-61
2.2.2.4 Gd-DTPA-(chol)2的合成61-62
2.2.2.5 Gd-DTPA-chol 和 Gd-DTPA-(chol)2分离纯化62
2.2.2.6 鉴定产物的钆含量62-63
2.2.2.7 产物的表征63
3 实验结果63-75
3.1 载脂蛋白 A-I 的表达纯化和鉴定63-67
3.1.1 pNFXex 质粒的转化63-64
3.1.2 载脂蛋白 A-I 的表达纯化分离64-65
3.1.3 载脂蛋白 A-I 的活性65-66
3.1.4 载脂蛋白 A-I 的α螺旋含量66-67
3.2 Gd-DTPA-chol 和 Gd-DTPA-(chol)2合成67-75
3.2.1 Gd-DTPA 和 Gd-(DTPA)2配体的合成67-72
3.2.2 Gd-DTPA-chol 和 Gd-DTPA-(chol)2螯合物的合成72-74
3.2.3 Gd-DTPA-chol 和 Gd-DTPA-(chol)2螯合物的钆含量测定74-75
4 浅析与讨论75-79
第三章 重组 HDL 的制备和表征79-99
1 前言79-81
1.1 肝脏磁共振成像的造影剂79-80
1.2 重组 HDL 的制作策略80-81
2 材料与策略81-87
2.1 材料与仪器81-83
2.1.1 实验试剂81
2.1.2 实验溶液81-82
2.1.3 实验仪器82-83
2.2 实验策略83-87
2.2.1 钆-重组高密度脂蛋白(Gd-HDL)的制作83-87
2.2.1.1 利用 Gd-DTPA-chol 制作 Gd-chol-HDL83
2.2.1.2 利用 Gd-DTPA-(chol)2制作 Gd-(chol)2-HDL83-84
2.2.1.3 重组 HDL 的分离纯化84
2.2.1.4 Gd-HDL 的蛋白浓度测定84-85
2.2.1.5 Gd-HDL 的钆浓度测定85
2.2.1.6 Gd-HDL 的粒径测定85-86
2.2.1.7 Gd-HDL 的透射电镜观察(TEM)86
2.2.1.8 Gd-HDL 纵向弛豫效率 r1的测定86-87
3 实验结果87-95
3.1 Gd-chol-HDL 和 Gd -(chol)2-HDL 的制备87-88
3.2 重组 Gd-HDL 的组分测定88-89
3.3 Gd-chol-HDL 和 Gd-(chol)2-HDL 的表征89-95
3.3.1 两种重组 HDL 的粒径分布89-91
3.3.2 Gd-HDL 的透射电镜观察91-94
3.3.3 Gd-HDL 的纵向弛豫效率 r1测定94-95
4 讨论与浅析95-99
第四章 重组 GD-HDL 的体外细胞实验99-116
1 前言99-103
1.1 体外细胞模型99
1.2 造影剂的毒性实验99-102
1.3 细胞毒性实验102-103
2 材料与策略103-107
2.1 材料与仪器103-105
2.1.1 实验材料103-104
2.1.2 实验溶液104
2.1.3 实验仪器104-105
2.2 实验策略105-107
2.2.1 重组 Gd-HDL 的细胞体外实验105-107
2.2.1.1 细胞培养105
2.2.1.2 细胞毒性实验105-106
2.2.1.3 细胞的摄取实验106-107
2.2.1.4 细胞的摄取抑制试验107
3 实验结果107-111
3.1 重组 HDL 对肝癌细胞 HepG2 的毒性探讨107-109
3.2 HepG2 细胞对重组 HDL 摄取的探讨109-110
3.3 竞争抑制 HepG2 细胞摄取重组 HDL 的探讨110-111
4 浅析与讨论111-116
第五章 重组 HDL 的体内 MRI 探讨116-126
1 前言116-117
1.1 以脂蛋白为基础的造影剂在 MRI 中的运用116-117
2 材料与策略117-119
2.1 材料与仪器117-118
2.1.1 实验试剂117-118
2.1.2 溶液配制118
2.1.3 实验仪器118
2.2 实验策略118-119
3 实验结果119-123
3.1 大鼠的 MRI 实验119-120
3.2 大鼠肝脏信号增强浅析120-123
4 浅析与讨论123-126
第六章 重组 HDL 介导基因靶向转染的探讨126-142
1 前言126-129
1.1 基因治疗126-129
2 材料与策略129-135
2.1 材料与仪器129-130
2.1.1 实验材料129-130
2.1.2 实验仪器130
2.2 实验策略130-135
2.2.1 阳离子脂质 CDAN 的合成130-131
2.2.2 重组 HDL 的合成131-132
2.2.3 重组 HDL 与 DNA 的复合实验132
2.2.4 细胞转染实验132-133
2.2.5 重组 HDL 的体内分布探讨133-135
3 实验结果135-140
3.1 阳离子的胆固醇衍生物 CDAN 的合成135
3.2 重组 HDL 与 DNA 复合后的粒径变化135-136
3.3 重组 HDL 的体外细胞转染实验136-137
3.4 重组 HDL 的体内分布探讨137-140
4 浅析与讨论140-142
第七章 包裹 SIRNA 的重组 HDL 的基因沉默探讨142-175
1 前言142-148
1.1 RNA 干扰142-144
1.2 siRNA 输送载体144-148
1.2.1 化学修饰的 siRNA145
1.2.2 融合蛋白修饰的 siRNA145-146
1.2.3 脂质体146
1.2.4 高聚物146-148
1.3 重组 HDL 用于 siRNA 输送的探讨148
2 材料与策略148-158
2.1 材料与仪器148-151
2.1.1 实验材料和仪器148-150
2.1.2 实验溶液150-151
2.1.3 RNA 酶灭活处理151
2.2 实验策略151-158
2.2.1 聚阳离子高聚物复合 siRNA151-152
2.2.2 重组 HDL 的制作152-153
2.2.3 重组 HDL 的电泳检测153
2.2.4 重组 HDL 的粒径和电位153-154
2.2.5 重组 HDL 的透射电镜观察(TEM)154
2.2.6 重组 HDL 的血清稳定性实验154
2.2.7 细胞体外实验154-157
2.2.7.1 细胞培养154-155
2.2.7.2 细胞毒性实验155
2.2.7.3 细胞转染实验155-157
2.2.7.3.1 靶向荧光素酶蛋白的 siRNA 转染实验155-156
2.2.7.3.2 非荧光素酶基因靶向的 siRNA 转染实验156-157
2.2.7.4 细胞荧光共聚焦实验157
2.2.8 动物的基因沉默实验157-158
3 实验结果158-171
3.1 重组 HDL 的制作158-159
3.2 重组 HDL 的粒径和电位表征159-162
3.3 重组 HDL 的透射电镜观察162-163
3.4 重组 HDL 的血清稳定性实验163-164
3.5 体外细胞实验164-170
3.5.1 细胞毒性实验164-166
3.5.2 细胞的基因沉默实验166-168
3.5.3 细胞的竞争抑制基因沉默实验168-169
3.5.4 细胞荧光共聚焦实验169-170
3.6 小鼠的基因沉默探讨170-171
4 浅析与讨论171-175
第八章 总结与展望175-179
1 全文总结175-176
2 革新点176-177
3 探讨展望177-179