色谱金属氧化物核壳型填料制备与在选择性吸附磷脂中运用查抄袭率

摘要：磷脂(Phosphoppids，PLs）是细胞膜的重要的结构物质，发挥着信号传导、细胞增殖和凋亡等重要生理作用。血清中磷脂和非磷脂类脂质分子的浅析对于疾病诊断具有重要作用,但由于磷脂在质谱浅析中易引起基质效应，给其它小分子浅析带来很大干扰，同时低丰度磷脂自身也有着检测困难的不足。本探讨制备两种具有二维结构和高比表面积的核壳型金属氧化物材料ZrO_2/SiO_2和TiO_2/SiO_2，并制成了SPE小柱，该材料能选择性地吸附磷脂分子，将血清中的脂质分成磷脂部分和非磷脂部分，提升磷脂的检测种类，结合LC-MS技术建立血清中磷脂代谢物轮廓浅析的新策略；同时考察去除磷脂后，血清中非磷脂部分的检测响应变化。本探讨为疾病诊断中发现更多的脂质类生物标志物提供策略基础。本论文的主要内容有:1.利用NH_3-H_2O内部水解法制备了二氧化锆包覆的二氧化硅(ZrO_2/SiO_2)核壳型填料，采取了X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)、紫外可见漫反射(UV-vis DRS)和氮气吸附解吸实验（BET）法进行了相关表征，结果显示制备二氧化锆包覆的二氧化硅填料具有较大的比面积，且二氧化锆呈无定形、高度不饱和Zr~(4+)的形式分散在二氧化硅表面，同时推测了反应形成的机理。2.将ZrO_2/SiO_2填料填充于SPE小柱用于选择性吸附磷脂的探讨。建立了反相C8色谱柱浅析5种磷脂标准品的Hplc-ELSD分离策略，并且优化了相关条件，评价了SPE小柱的富集效率，结果显示ZrO_2/SiO_2SPE的策略回收率均比ZrO_2高，对其理由进行了解释。3.运用水蒸汽水解法制备了二氧化钛包覆的二氧化硅(TiO_2/SiO_2)核壳型材料，并利用X射线衍射(XRD),紫外可见漫反射(UV-vis DRS),扫描电子显微镜(SEM)等进行了相关表征，证明二氧化钛的确包覆在二氧化硅表面，且成无定形状态，利于磷脂的吸附。4.基于SPE-UPLC-Q-TOF技术平台，探讨了选择性吸附血清脂质中磷脂的策略。首先选用5种磷脂标准品，评价了ZrO_2/SiO_2和TiO_2/SiO_2装填的SPE小柱对其的吸附能力，发现仅在洗脱液中可以看到这五种磷脂，而在上样液和清洗液中都检测不到，说明ZrO_2/SiO_2和TiO_2/SiO_2装填的SPE小柱对磷脂具有很好的吸附能力。然后将其用于实际血清样品的浅析，发现与通常的直接进样方式相比，鉴定出的代谢物种类增加，ZrO_2/SiO_2增加了938种，TiO_2/SiO_2增加了946种；且在上样液和清洗液中，由于排除了磷脂的基质效应，其他非磷脂代谢产物，如甘油三酯等的信号也有增强。本探讨将为代谢组学特别是脂质组学提供了新的策略平台。5.将上面陈述的技术进一步运用于胰腺癌代谢组学的探讨中。将正常人和胰腺癌的血清样品用ZrO_2/SiO_2装填的SPE小柱处理，然后用UPLC-Q-TOF获取代谢谱，经过数据浅析，发现利用ZrO_2/SiO_2SPE技术可发现更多的潜在差别代谢物。关键词：磷脂论文固相萃取论文金属氧化物论文核壳结构论文二氧化锆论文二氧化钛论文反相液相色谱-蒸发光散射检测器论文超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱论文

摘要5-7

ABSTRACT7-12

第一章 绪论12-26

1.1 磷脂的介绍12-15

1.1.1 磷脂的结构和特点12-13

1.1.2 磷脂的分类13-15

1.2 磷脂的浅析策略15-21

1.2.1 磷脂的提取策略15-16

1.2.2 磷脂的分离策略16-18

1.2.3 磷脂的检测策略18-21

1.2.4 LC-MS 在磷脂代谢中的运用21

1.3 磷脂特异性吸附新策略探讨21-25

1.3.1 基质效应21-22

1.3.2 金属氧化物吸附磷脂的可性性22-23

1.3.3 金属氧化物吸附磷脂的相关探讨进展23

1.3.4 金属氧化物吸附磷脂的有着的不足23-25

1.4 本课题探讨的作用和探讨内容25-26

第二章 ZrO_2/SiO_2核壳型颗粒的制备以及表征26-34

2.1 引言26

2.2 实验26-28

2.2.1 仪器和试剂26-27

2.2.2 二氧化锆包覆二氧化硅颗粒的制备27

2.2.3 二氧化锆包覆二氧化硅颗粒的表征27-28

2.3 结果与讨论28-33

2.3.1 ZrO_2/SiO_2核壳型颗粒的合成28

2.3.2 ZrO_2/SiO_2核壳型颗粒的表征28-32

2.3.3 ZrO_2/SiO_2核壳型颗粒形成机理32-33

2.4 本章小结33-34

第三章 基于 Hplc-ELSD 的 ZrO_2/SiO_2在选择性吸附磷脂的中的运用探讨34-44

3.1 引言34

3.2 实验部分34-36

3.2.1 仪器和试剂34-35

3.2.2 ZrO_2/SiO_2填料制备35

3.2.3 固相萃取步骤35

3.2.4 HPLC-ELSD 浅析35-36

3.3 结果与讨论36-43

3.3.1 RPLC-ELSD 浅析磷脂36-40

3.3.2 核壳型材料 ZrO_2/SiO_2吸附磷脂的探讨40-43

3.4 本章小结43-44

第四章 TiO_2/Si02核壳型颗粒的制备44-49

4.1 引言44

4.2 实验部分44-45

4.2.1 仪器和试剂44

4.2.2 二氧化钛包覆的二氧化硅的制备44-45

4.2.3 二氧化钛包覆的二氧化硅的表征45

4.3 结果与讨论45-48

4.4 小结48-49

第五章 ZrO_2/SiO_2和 TiO_2/SiO_2在血清磷脂代谢轮廓谱中的运用49-78

5.1 引言49

5.2 实验49-51

5.2.1 仪器和试剂49-50

5.2.2 血清脂质提取50

5.2.3 固相萃取操作步骤50

5.2.4 UPLC-Q-TOF 浅析50-51

5.3 结果与讨论51-76

5.4 本章小结76-78

第六章 利用 SPE-UPLC-Q-TOF MS 的胰腺癌的血清代谢组学探讨78-85

6.1 引言78

6.2 实验78-80

6.2.1 仪器和试剂78

6.2.2 样本采集78-79

6.2.3 血清样品预处理79

6.2.4 固相萃取操作步骤79

6.2.5 UPLC-Q-TOF 浅析79-80

6.2.6 数据预处理80

6.3 结果与讨论80-84

6.4 本章小结84-85