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摘要：目的观察不同浓度尿酸对体外培养的肾小管上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)及活性氧族(ROS)的影响,探讨尿酸损害肾小管上皮细胞的可能机制。策略分离肾小管上皮细胞,将其分为对照组与尿酸干预组(尿酸干预组分0.1、0.2、0.4、0.8mmol/L共4个亚组)、NADPH酶抑制组,每组重复6孔；紫外分光光度法测定肾小管上皮细胞内NADPH酶蛋白水平；光泽精化学发光法测定肾小管上皮细胞内超氧阴离子(o)生成量；TUNEL法与琼脂糖凝胶电泳法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果24h后,0.1mmol/L尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与(?)生成量较对照组仅轻微增高,0.2、0.4、0.8mmol/L尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与(?)生成量较对照均显著增高,差别有统计学作用(P0.01)；对照组细胞均未形成显著的DNA凋亡梯带,0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组均可见显著的DNA凋亡梯带,0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组DNA凋亡梯带较0.1mmol/L、0.2mmol/L尿酸干预组更为显著。TUNEL结果显示：对照组、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组的凋亡率分别为(17.5±1.0)‰、(72.4±12.4)‰、(136.8±13.4)‰、(328.7±32.6)‰、(427.2±51.5)‰,0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组细胞凋亡率显著高于对照组(尸0.01,n=6),各尿酸干预组之间细胞凋亡率随着尿酸干预浓度的增高而增高；相关浅析发现肾小管上皮细胞凋亡率与肾小管上皮细胞内NADPH酶蛋白水平及(?)生成量显著正相关(丫=0.765,0.792；P0.01)。结论肾小管上皮细胞在持续高尿酸的作用下,可激活细胞内NADPH酶蛋白表达,释放(?),启动氧化应激级联反应,使肾小管上皮细胞持续受损而导致肾小管上皮细胞凋亡增加。关键词：尿酸论文还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸论文超氧阴离子论文肾小管上皮细胞论文凋亡论文
摘要4-6
ABSTRACT6-9
主要英文縮略词9-10
第一章 前言10-12
第二章 材料与策略12-18
2.1 材料12-14
2.1.1 主要仪器和设备12
2.1.2 主要试剂12-13
2.1.3 主要溶液配制13-14
2.2 策略14-17
2.2.1 肾小管上皮细胞分离与培养14
2.2.2 细胞传代14-15
2.2.3 实验分组15
2.2.4 NADPH测定15
2.2.5 超氧阴离子的测定15
2.2.6 TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡15-16
2.2.7 琼脂糖凝胶电泳法检测肾小管上皮细胞凋亡16-17
2.3 数据处理17-18
第三章 结果18-21
3.1 肾小管上皮细胞形态与鉴定18
3.2 肾小管上皮细胞内NADPH酶蛋白水平与O_2~-生成量18-19
3.3 肾小管上皮细胞凋亡19-21
第四章 讨论21-23
第五章 结论23-24