本站原创
摘要：目的：分别观察促肾上腺皮质激素(ACTH1-24和ACTH4-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)对正常足细胞裂孔膜蛋白分子podocin核酸水平,纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和平滑肌肌动蛋白(α-ooth muscle actin,a-A)蛋白水平的影响,以期能够探讨ACTH1-24和ACTH4-10对肾脏足细胞表型的影响以及预防性保护机制,并明确在预防性保护TGF-β1对正常肾脏足细胞的损伤方面,ACTH1-24和ACTH4-10发挥的作用是否相似。策略：1.细胞培养：根据文献将复苏的条件永生型小鼠足细胞系MPC5细胞,于33℃中增殖培养,平均3～4d达80%以上融合传代,更换于37℃中培养,平均10～14d分化为成熟,此时为分化态MPC5,观察正常状态下足细胞的形态,细胞状态良好时可以用于实验；将细胞接种于六孔板,试验前用无血清RPMI1640培养液调整细胞生长状态,使细胞同步化。2.细胞分组：将细胞分为ACTH1-24预防实验组和ACTH4-10预防实验组,ACTH1-24处理组和ACTH4-10处理组又分别分为A,B两组,A组：预先加入ACTH1-24(或ACTH4-10)处理1h,后加入TGF-β1处理24h；B组：预先加入ACTH1-24(或ACTH4-10)处理1h,后加入TGF-β1处理48h。根据文献,ACTH1-24分别设低浓度(75ng/ml)、中浓度(150ng/ml)、高浓度(300ng/ml)三种浓度刺激足细胞；ACTH4-10亦分别设低浓度(1ng/ml)、中浓度(10ng/ml)、高浓度(100ng/ml)三种浓度刺激足细胞；根据文献,选取2ng/ml为TGF-β1处理足细胞浓度,刺激时间为24h与48h。3.检测指标：足细胞裂孔膜蛋白分子podocin mRNA表达水平,纤维连接蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-A)蛋白表达水平。结果：ACTH1-24预防实验组：与对照组相比,TGF-β1处理组的podocin的核酸表达水平显著降低,降低约54.9%；FN的蛋白表达水平显著升高,升高约2.3倍；α-A的蛋白表达水平显著升高,升高约2.4倍。与对照组相比,ACTH1-24处理组的podocin的核酸表达水平升高,升高约7.5%；FN的蛋白表达水平降低,降低约0.1%;α-A的蛋白表达水平升高,升高约1.7%。与对照组相比,ACTH1-24低、中、高三种浓度与TGF-β1处理组podocin的核酸表达水平呈现上升走势,分别升高1.3倍、2.4倍、1.2倍；而与TGF-β1处理组相比,FN的蛋白表达水平呈现下降走势,分别下降0.1%、7.3%、40.1%；与TGF-β1处理组相比,ACTH1-24低、中浓度与TGF-β1处理组a-A的蛋白表达水平呈现上升走势,分别升高约4.5%,11.8%；ACTH1-24高浓度与TGF-β1处理组a-A的蛋白表达水平降低,降低约22.4%。ACTH4-10预防实验组：与对照组相比,TGF-β1处理组的podocin的核酸表达水平显著降低,降低约57.9%；FN的蛋白表达水平显著升高,升高约18.6倍；a-A的蛋白表达水平显著升高,升高约90.6%。与对照组相比,ACTH4-10处理组的podocin的核酸表达水平升高,升高约8.3%；FN的蛋白表达水平升高,升高约4.8%;a-A的蛋白表达水平升高,升高约28.9%。与对照组相比,ACTH4-10低、中、高三种浓度与TGF-β1处理组podocin的核酸表达水平呈现上升走势,分别升高5.5%,64.3%,1.7倍；而与TGF-β1处理组相比,ACTH4-10低、中浓度与TGF-β1处理组FN的蛋白表达水平呈现上升走势,分别升高约8.8%,9.2%；ACTH4-10高浓度与TGF-β1处理组FN的蛋白表达水平降低,降低约13.1%；与TGF-β1处理组相比,ACTH4-10低浓度与TGF-β1处理组a-A的蛋白表达水平升高,升高约3.8%;ACTH4-10中、高浓度与TGF-β1处理组a-A的蛋白表达水平呈现下降走势,分别降低约5.6%,35.5%。结论：ACTH1-24与ACTH4-10都可以直接作用于足细胞,稳定足细胞裂孔膜蛋白分子podocin的表达,以而维持裂孔隔膜(SD)结构和功能的完整,同时,ACTH1-24可以抑制细胞外基质成分纤维连接蛋白(FN)以及平滑肌肌动蛋白(a-A)的升高,以而拮抗TGF-β1对足细胞的表型转变,发挥保护足细胞的作用。在拮抗TGF-β1导致的足细胞表型转变以及对足细胞的预防保护方面,ACTH4-10与ACTH1-24发挥的作用相似,但具体的起效药物浓度略有不同。关键词：促肾上腺皮质激素论文转化生长因子β1论文MPC5培养论文足细胞表型论文裂孔膜蛋白论文纤维连接蛋白论文平滑肌肌动蛋白论文
中文摘要4-6
Abstract6-10
引言10-13
1 试剂与材料13-14
2 策略14-24
3 结果24-29
4 讨论29-37
5 结论37-38