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摘要：[目的]探讨藻黄合剂(ZaoHuang mixture,ZHM)含药血清对高糖环境下原代培养人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)增殖及其结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)表达的影响,以细胞分子水平探讨ZHM对糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)的保护作用及其作用机理。[策略]血清药理学策略制备ZHM低、中、高剂量组,空白对照组及海昆肾喜胶囊阳性对照组(以下简称海昆肾喜组)大鼠含药血清,并进行HMC原代培养与鉴定。分别用体积分数10%各含药血清培养基孵育高糖作用下HMC24、48、72h,另设低糖组作为对照,CCK-8试剂盒检测各组HMC的增殖情况；选取48h为时间点,免疫细胞化学及RT-PCR技术检测各组HMC CTGF蛋白及mRNA表达：ELISA及RT-PCR技术检测各组HMC MCP-1蛋白及其mRNA表达。[结果](1)成功培养出HMC,免疫荧光鉴定示肌动蛋白、肌球蛋白、波形蛋白、结蛋白表达阳性,Ⅷ因子及细胞角蛋白表达阴性。(2)高糖刺激后HMC显著增殖,ZHM各剂量组可不同程度抑制高糖刺激的HMC增殖且具有显著的剂量依赖性,海昆肾喜阳性对照组与ZHM中、高剂量组对细胞增殖的抑制作用差别无统计学作用(P0.05)。(3)高糖组CTGF蛋白及mRNA表达较低糖组显著升高(P0.01), ZHM中、高剂量组及海昆肾喜组CTGF蛋白及mRNA表达均低于高糖组,其中CTGFmRNA表达在中剂量组(P0.05),余各组(P0.01)。ZHM中、高剂量组与海昆肾喜组比对高糖作用下CTGF蛋白及mRNA表达增加的抑制作用差别无统计学作用(P0.05)。(4)MCP-1蛋白及：mRNA表达在高糖组较低糖组显著升高(P0.01),与高糖组相比,ZHM中、高剂量及海昆肾喜组对抑制高糖所致的MCP-1蛋白及mRNA表达增加均有统计学作用(P0.01),且具有显著的剂量依赖性。ZHM中、高剂量组与海昆肾喜组比对抑制高糖所致的MCP-1蛋白表达增加差别无统计学性作用(P0.05)。[结论](1)成功培养出纯度较高的HMC,并摸索出HMC培养的最佳条件,为下一步探讨ZHM含药血清对HMC干预作用奠定了实验基础。(2)高糖可诱导HMC增殖,而ZHM可抑制高糖作用下HMC增殖,且具有剂量依赖性。(3)高糖可推动HMC分泌CTGF及MCP-1,而ZHM可抑制高糖条件下HMC中CTGF及MCP-1蛋白及mRNA的表达增加,并具有剂量依赖性。(4)ZHM对高糖诱导HMC增殖及其CTGF、MCP-1分泌增加的拮抗作用可延缓肾小球硬化及纤维化进展,这可能是其防治DKD的作用机理之一。关键词：藻黄合剂论文血清药理学论文人肾小球系膜细胞论文细胞增殖论文结缔组织生长因子论文单核细胞趋化蛋白1论文
中文摘要6-8
ABSTRACT8-10
英文缩略词10-11
主要仪器和设备11-12
主要材料及试剂配制12-15
前言15-20