摘要：肾细胞癌(RCC)是最常见的肾癌,在RCC中透明细胞组织学是最普遍的,占80-90%的病例。尽管缺乏RCC筛查,大多数患者体现为早期肾细胞癌并且许多可以治愈肾脏切除术，尽管没有证据表明转移在术前就已经发生然而20-30%的患者进行了手术会复发。多数具有临床症状的患者往往伴随着肿瘤的转移，预后很差。传统的化疗，激素疗法或者放疗对于恶性程度高的肾细胞癌并没有有效的制约。然而，基于肾细胞癌的分子水平，新的治疗对策不同程度上显示一定的临床治疗效果。查阅肾细胞癌的相关文献显示，与肿瘤相关的PI3K/T/mTOR信号通路在肾细胞癌中异常表达，可能与肾细胞的发生进展有着密切的联系，同时体外探讨显示，mTOR抑制剂可以显著的引起肾细胞细胞发生凋亡，显示出良好的肿瘤抑制作用。我们探讨结果显示，相对于癌旁组织，PI3K/T/mTOR信号通路蛋白p-T和p-p70S6K在肾细胞癌中显著高表达，提示PI3K/T/mTOR信号通路可以肾细胞癌治疗的一个分子层面上的靶点。NVP-BEZ235，一种新型的PI3K和mTOR的双重抑制剂，显示出良好的抑制作用。除了参与细胞增殖外，PI3K/T/mTOR信号还可以抑制细胞自体吞噬（Autophagy）的发生，而自噬和吞噬的发生往往对于化疗药物引起的细胞凋亡体现出一定的保护作用，联合运用NVP-BEZ235和自噬抑制剂可能可以显著的提升NVP-BEZ235引起的细胞凋亡。本课题在前期探讨的基础上，通过体外培养肾细胞癌786-0细胞系，探讨NVP-BEZ235对于肾细胞癌786-0细胞存活率的影响，以及NVP-BEZ235引起的自噬对于NVP-BEZ235引起的细胞存活率的转变的影响。目的:探讨新型磷脂酰肌醇3-激酶/哺乳动物雷帕霉素（PI3K/mTOR）抑制剂NVP-BEZ235对肾细胞癌786-0细胞增殖、自噬和凋亡的影响。寻找新的治疗肾细胞癌的对策。策略:通过收集临床肾细胞组织标本和体外培养肾细胞癌786-0细胞，利用Western Blotting检测肾细胞组织标本中PI3K/T/mTOR信号通路蛋白表达的变化。利用MTT策略检测PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对肾细胞癌786-0细胞增殖的影响，同时利用不同阶段的自噬抑制剂探讨抑制自噬对于NVP-BEZ235引起的凋亡的影响。NVP-BEZ235对肾细胞癌786-0细胞增殖、自噬和凋亡的影响结果:相对于癌旁肾组织，肾细胞癌组织中PI3K/T/mTOR信号通路蛋白p-T和p-p70S6K表达水平升高。PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235在体外可以显著的抑制肾细胞癌786-0细胞增殖，同时可以引起凋亡相关蛋白Cleed caspase-3以及PARP表达水平的升高。在引起786-0细胞发生凋亡的同时，NVP-BEZ235还引起自噬相关蛋白LC3以及p62表达水平的变化。利用自噬不同阶段抑制剂3-MA，氯喹以及氯化铵可以显著增高NVP-BEZ235引起的786-0的增殖抑制和凋亡。结论: PI3K/T/mTOR信号通路蛋白在肾细胞癌组织中表达水平升高；PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235可以显著的抑制肾细胞786-0细胞增殖和推动凋亡的发生；自噬抑制剂可以显著提升NVP-BEZ235引起的786-0的增殖抑制和凋亡。关键词：肾细胞癌论文NVP-BEZ23论文丝氨酸/苏氨酸激酶论文自体吞噬论文细胞凋亡论文
中文摘要4-7
Abstract7-14
第1章 文献综述14-42
1.1 转移性肾肿瘤治疗最新进展14-31
1.1.1 免疫药物治疗转移性肾肿瘤进展15-22
1.1.2 外科手术治疗转移性肾肿瘤22-26
1.1.3 靶向药物治疗转移性肾肿瘤26-31
1.2 NVP-BEZ235 的临床运用进展31-42
1.2.1 NVP-BEZ235 作用机制31-32
1.2.2 NVP-BEZ235 抗肿瘤作用原理32-36
1.2.3 NVP-BEZ235 对于肾肿瘤治疗的临床运用进展36-40
1.2.4 NVP-BEZ235 在非小细胞肺癌的临床运用进展40-42
第2章 本探讨的背景和立题依据、探讨内容和作用以及设计思路42-46
第3章 材料和策略46-52
3.1 材料和试剂46-47
3.1.1 肾细胞组织的获得46
3.1.2 细胞株46
3.1.3 试剂46-47
3.1.4 仪器和软件47
3.2 策略47-52
3.2.1 细胞活力测定47-48
3.2.2 肾细胞组织的获得48
3.2.3 蛋白溶解产物获得、细胞溶解及溶解后蛋白质浓度测定48-49
3.2.4 Western blot 检测49-50
3.2.5 统计浅析50-52
第4章 结果和浅析52-72
4.1 实验 1：PI3K/T/mTOR 途径在肾肿瘤组织内表达52-54
4.2 实验 2：PI3K/mTOR 抑制剂NVP对于肾细胞癌786-0细胞株生长的抑制54-58
4.2.1 探讨NVP对于肾细胞癌786-0细胞株生长的影响54-56
4.2.2 探讨NVP对于肾细胞癌786-0细胞中 PI3K/T/mTOR途径影响56-58
4.3 实验 3：NVP对于肾细胞癌786-0细胞株的凋亡的影响58-59
4.4 实验 4：NVP对于肾细胞癌786-0细胞株自体吞噬的影响59-61
4.5 实验 5：NVP联合自噬抑制剂对于肾细胞癌786-0细胞株的影响61-66
4.6 实验 6：NVP联合自噬抑制剂对786-0细胞生长抑制的影响66-68
4.7 实验 7：NVP联合自噬抑制剂对786-0细胞凋亡的影响68-72
第5章 讨论和革新点72-78
5.1 PI3K/T/mTOR 信号通路蛋白的表达与肾肿瘤联系72
5.2 PI3K/mTOR 抑制剂NVP对于肾细胞癌786-0细胞株生长的抑制72-73
5.3 PI3K/mTOR 抑制剂NVP对于肾细胞癌786-0细胞株凋亡的影响73
5.4 PI3K/mTOR 抑制剂NVP对于肾细胞癌786-0细胞株自噬的影响73-74
5.5 细胞凋亡与细胞自噬的联系74-75
5.6 PI3K/mTOR 抑制剂NVP联合细胞自噬抑制剂对于肾细胞癌786-0 细胞株的影响75
5.7 PI3K/mTOR 抑制剂 NVP 联合细胞自噬抑制剂对于肾细胞癌786-0 细胞株细胞凋亡的影响75-76
革新点76-78
第6章 结论78-80
本站原创