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摘要：背景与目的干细胞具有很强的自我复制与多向分化潜能,在细胞治疗、组织工程以及再生医学领域内均有广阔的运用前景,为目前一些无法治愈的重大疾病,如周围神经损伤、脊髓损伤、骨缺损等骨科棘手疾病的治疗提供了崭新的方向。人脐带间充质干细胞与人胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞相比,具有易于分离培养,免疫原性低,体外增殖分化能力强等特性,具备作为理想的种子细胞的条件。在体外,培养条件是决定干细胞分化方向的调控器,适当的诱导剂如维生素C、甘油磷酸钠、地塞米松及一些生长因子等均可有效诱导干细胞向成骨样细胞分化。传统的成骨诱导液,成分复杂,细胞毒性较大,由此建立一种理想的成骨诱导案例一直是人们探讨的热点。新近探讨表明1,25(OH)2VD3不仅是一种全身性钙、磷调节激素,同时还是细胞生长和分化的调节因子,可以调控干细胞的增殖与分化。本实验旨在探讨人脐带组织间充质干细胞(UCMSCs)体外分离扩增及鉴定的策略,并探讨不同浓度的1,25(OH)2VD3对人UCMSCs增殖及成骨分化的影响,尝试为骨组织工程寻求一种新的体外成骨的案例。策略在无菌条件下获取正常足月剖腹产胎儿脐带,利用组织块贴壁培养法分离细胞,并进行传代培养及纯化；取第2代生长良好的贴壁细胞,通过免疫组化法测定细胞表面特异标志物表达的情况；取传代培养的第三代人UCMSCs进行细胞爬片,待细胞生长至60%-70%融合时分四组进行干预实验：设置10-7mol/L、10-13mol/L、10-11mol/L3种浓度的1,25(OH)2VD3作为实验组,并设空白对照组(常规DMEM培养基)。动态观察干预前后各组细胞的形态变化,四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖,免疫组化法检测碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原蛋白表达,茜素红染色观察矿化结节形成情况。将结果进行统计学浅析。结果组织块贴壁培养法可获得人UCMSCs,镜下可见最初为圆形,渐渐伸出突起,形成长条状细胞,类似成纤维细胞,1W后扩增迅速,成漩涡状生长。免疫细胞化学显示CD44、CD105阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特点。1,25(OH)2VD3对人UCMSCs增殖的影响体现为少于7d推动增殖,超过7d抑制增殖,高剂量组(10-7mol/L组)抑制干细胞增殖效应更显著。1,25(OH)2VD3对人UCMSCs成骨分化影响体现为10-11mol/L组促碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白分泌作用高于10-7mol/L组、10-9mol/L组,低剂量1,25(OH)2VD3推动成骨细胞分化作用更显著(P0.05)。实验组在加入1,25(OH)2VD3诱导后多角形细胞显著增加,显著向成骨样细胞分化。茜素红染色后镜下可见细胞密集处有棕红色的沉着物,呈团样中心颜色深,四周有突起。结论组织块贴壁培养法可以在脐带组织中获取人UCMSCs,适当浓度的1,25(OH)2VD3可以有效调节人UCMSCs增殖并推动其向成骨细胞分化,为骨组织工程及骨缺损的治疗提供论述基础。关键词：UCMSCs论文1论文25(OH)_2VD_3论文诱导分化论文成骨细胞论文组织工程论文
中文摘要4-6
Abstract6-10
英文縮写词表10-11
引言11-13
1 材料13-16
2 策略16-19
3 结果19-22
4 讨论22-28
5 结论28-29
附图29-31