本站原创
摘要：BTLA是2003年发现的Ig家族成员，是与CTLA-4及PD-1类似的抑制性受体。人的BTLA基因定位于染色体3q13.2，与小鼠具有48%的同源性。BTLA mRNA在脾脏及淋巴结组织中高表达，在肾脏、肝脏、肺、脑、心脏及肌肉等组织中表达量都很低，甚至不表达。BTLA广泛表达于T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞表面。BTLA含有一个信号序列、一个免疫球蛋白可变区（IgV）样的胞外段、跨膜区和大约100个氨基酸的胞浆区。BTLA胞浆区有着3个重要的含酪氨酸残基的基序:潜在的Grb2结合位点，免疫受体酪氨酸抑制基序和免疫受体酪氨酸转换基序。探讨表明，BTLA与其配体HVEM结合可以抑制T细胞的增殖和细胞因子的分泌，推迟细胞周期的进程，以而抑制或终止免疫应答。在持续的抗原刺激下，BTLA高度选择性表达在无能CD4+T细胞上，表明BTLA信号在诱导与维持T细胞无能状态的历程中有重要作用。另外，BTLA不仅在在维持外周免疫耐受中具有重要作用，还可以预防自身免疫疾病的发生，终止炎症反应，抑制移植免疫应答。BTLA在初始和活化T细胞上都有表达，由此，Murphy提出BTLA可能在T细胞活化的各个阶段尤其是早期阶段发挥作用。本探讨首先浅析了BTLA-HVEM顺式复合物的有着对细胞表面BTLA分子表达水平检测的影响，进而探讨了BTLA在T细胞活化起始和早期阶段的调节作用。一、BTLA-HVEM顺式复合物对细胞表面BTLA分子检测的影响【目的】T细胞和U937细胞表面有着BTLA和HVEM共表达的现象。探讨BTLA-HVEM顺式复合物有着对细胞表面BTLA分子检测的影响。【策略】分离人外周血单个核细胞，经阴性选择磁珠分离纯化获得T淋巴细胞。采取流式细胞术的策略，用抗不同BTLA位点的商品化单抗MIH26和本室研制的单抗8H9分别检测U937和T细胞等细胞表面BTLA分子的表达水平。293T/BTLA基因转染细胞上BTLA分子的检测采取8H9单抗。【结果】商品化单抗MIH26(0.5μg)检测T细胞和U937细胞上BTLA分子的表达量分别为90%以上，而8H9单抗（1μg）检测到二者的表达水平分别为42.2%、30.8%。采取0.02μg和0.05μg的8H9单抗检测293T/BTLA转基因细胞株，显示BTLA分子的表达量分别为80%和91.4%。【结论】T细胞和U937细胞上共表达的BTLA和HVEM形成顺式复合物，影响8H9对BTLA的检测，而不影响MIH26的检测。二、BTLA对T细胞活化启动和早期阶段的调节作用【目的】观察BTLA在T细胞活化历程中的表达变化，探讨其在T细胞活化各个阶段尤其是早期阶段的抑制作用。【策略】分离人外周血单个核细胞，经磁珠分选获得纯化的T细胞。用激发型CD3抗体和CD28抗体刺激T细胞活化，采取流式细胞术，检测BTLA、CTLA-4和PD-1在T细胞活化历程中的动态表达。激发型CD3抗体和CD28抗体在加入BTLA单抗8H9的情况下刺激T细胞活化，流式细胞术检测T细胞活化早期标志分子CD25和CD69的表达。激发型CD3抗体和CD28抗体联合HVEM-Fc或者BTLA单抗8H9，观察BTLA信号在活化后的不同时间对T细胞增殖的作用。同时，采取ELISA策略检测8H9对CD3单抗联合CD28单抗刺激的T细胞分泌IL-2和IFN-γ的影响。预先用CD3和CD28抗体刺激T细胞活化后，在24h，48h，72h分别加入8H9抗体并交联，观察缺失BTLA信号对T细胞活化抑制的减弱程度。【结果】BTLA在T细胞上组成性高表达，活化后表达有所降低，然后迅速回升；CTLA-4在静止T细胞上不表达，PD-1的表达水平很低，二者都是活化后被诱导表达。激发型CD3抗体和CD28抗体联合8H9刺激T细胞后，CD25和CD69的表达均受到抑制。激发型CD3抗体和CD28抗体联合8H9或者HVEM-Fc刺激后，在刺激后的1d，2d，3d，4d检测，均对T细胞有抑制作用。同时，8H9对CD3单抗联合CD28单抗刺激的T细胞分泌的IL-2和IFN-γ具有抑制效应。CD3抗体和CD28抗体预先活化T细胞24h，48h，72h后，再加入8H9抗体仍然具有抑制功能，但不如在T细胞活化之初加入8H9的效应。【结论】BTLA可以在T细胞活化的启动和早期阶段发挥重要的负性调节作用，以而抬高T细胞活化的阈值。关键词：BTLA论文抑制论文T细胞活化论文早期论文
中文摘要4-6
Abstract6-10
探讨背景10-29