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摘要：目的：探讨降脂消斑片君药虎杖重要有效成分白藜芦醇对脂多糖(ppopolysaccharide,LPS)诱导的人单核细胞THP-1迁移及高迁移率族蛋白B1(High-mobipty group box-1protei n,HM GB1)表达的影响以以该角度探讨降脂消斑片可能作用机制。策略：(1)生长良好的THP-1(?)田胞随机分为以下6组(n=3)：①空白组：THP-1细胞；②脂多糖(LPS)刺激组：THP-1+5μ/／ml LPS;③低浓度白藜芦醇组：5μg/ml LPS+0.001mM白藜芦醇；④中浓度白藜芦醇组：5μg/ml LPS+0.02mM白藜芦醇；⑤白藜芦醇高浓度组：5μg/ml LPS+0.05mM白藜芦醇；⑥PDTC组：5μg/ml LPS+0.01mM PDTC.(2)Transwell小室检测各组上清液对THP-1细胞的迁移作用。(3)ELISA法检测各组上清液中HMGB1和MCP-1的蛋白浓度。(4)实时PCR检测①②⑤组细胞HMGB1的mRNA表达；蛋白印迹法检测HMGB1和核因子-kappaB的蛋白表达。(5)凝胶迁移率实验检测①②⑤组细胞核因子-kappaB p65的活性。(6)细胞免疫荧光技术观察①②⑤组细胞HMGB1的核转位。结果：(1)与空白对照组比较L PS刺激组上清液诱导THP-1细胞的迁移增强(P0.05),中、高浓度白藜芦醇组和PDTC组均显著抑制上面陈述的迁移效应(三者P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组THP-1细胞释放HMGB1和MCP-1显著增加(P0.001),白藜芦醇浓度依赖性地抑制HMGB1知MCP-1的释放,PDTC对上面陈述的效应也有抑制作用,各组和LPS组比较均有统计学差别(各组P0.001)。(3)和空白对照组比较,LPS诱导THP-1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达均增加(两者P0.001),高浓度白藜芦醇组显著抑制这一效应(两者与L PS组比较P0.001)。(4)LPS刺激THP-1后,核因子-kappaB p65的蛋白表达(P0.001)及其活性上调,白藜芦醇显著抑制这一效应(P0.001)。(5)LPS诱导HMGB1以THP-1细胞核内转移至胞浆,白藜芦醇部分抑制这一效应。结论：(1)白藜芦醇抑制LPS诱导的THP-1细胞分泌HMGB1及其活化。(2)核因子-kappaB参与L PS诱导的HMGB1上调,白藜芦醇抑制核因子-kappaB的表达与活化,并可能通过这一途径抑制HMGB1的上调与活化。(3)白藜芦醇抑制THP-1迁移,这一作用可能与抑制HMGB1与核因子kappaB途径相关。(4)降脂消斑片抗动脉硬化有效与该药含白藜芦醇有关。关键词：白藜芦醇论文高迁移率族蛋白B1论文单核细胞论文核因子-kappaB论文p65论文
缩略词表4-5
中文摘要5-6
Abstract6-7
引言7-9
1 材料9-11
1.1 实验细胞9
1.2 试验用药9
1.3 实验试剂9-10
1.4 实验仪器10-11
2 实验策略11-20
2.1 THP-1细胞的培养11-12
2.2 MTT确定白藜芦醇、LPS的最佳浓度12-13
2.3 细胞分组及干预13-14
2.4 各组细胞培养上清液对THP-1细胞的迁移作用14
2.5 HMGB1的ELISA检测14
2.6 MCP-1的ELISA检测14
2.7 实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)14-17
2.8 Western blot实验17-18
2.9 凝胶迁移率实验(Electrophoretic mobipty Shift assay,EMSA)18
2.10 免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色18-19
2.11 统计策略19-20
3 结果20-29
3.1 细胞形态学观察20
3.2 不同浓度LPS干预下THP-1细胞增殖活性20
3.3 白藜芦醇干预抑制LPS诱导的上清液对THP-1细胞的迁移作用20-21
3.4 白藜芦醇抑制LPS诱导THP-1细胞释放HMGB121-22
3.5 白藜芦醇抑制LPS诱导THP-1细胞释放MCP-122-23
3.6 白藜芦醇干预抑制LPS诱导的THP-1细胞HMGB1 mRNA表达23-24
3.7 白藜芦醇干预抑制LPS诱导的THP-1细胞HMGB1和核内核因子-kappaB p65蛋白表达24-26
3.8 THP-1细胞中白藜芦醇抑制LPS诱导增强的核因子-kappaB活性26-27
3.9 白藜芦醇抑制LPS诱导的THP-1细胞HMGB1核转位与活化27-29
4 讨论29-35
5 结论35-36