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[摘要] 目的 研究红毛五加提取物的抗肿瘤活性。 方法 分别采用MTT法、形态学、流式细胞术方法检测纯氯仿洗脱部分对肿瘤细胞OVCAR3的生长抑制及促凋亡。 结果 MTT法可见氯仿洗脱部分对体外培养的卵巢上皮癌细胞OVCAR3的生长有抑制作用，高、低剂量组抑制率分别为20.6%、11.4%；形态学以及流式细胞术都可见氯仿洗脱部分可以促进OVCAR3凋亡。 结论 红毛五加纯氯仿洗脱部分对肿瘤细胞株OVCAR3细胞有促凋亡的作用。
[关键词] 红毛五加；凋亡；OVCAR3；卵巢癌
[] A[文章编号] 1674-4721（2012）07（c）-0010-03
Apoptosis of ovarian cancer cell lines OVCAR-3 induced by the extract Acanthopanax giraldii Harms
OUYANG Zizhang1 LONG Qicai2
1. The People′s Hospital of Qingyuan City in Guangdong Province, Qingyuan 511518, China; 2. College of Pharmacy, Sun Yat-sun University, Guangdong Province, Guangzhou 510006, China
[Abstract] Objective To investigate the anti-tumor activity of extract from Acanthopanax giraldii Harms. Methods Growth inhibition and promote apoptosis of cancer cell lines OVCAR3 by the chloroform eluting parts were measured by MTT method, morphological method and flow cytometry methods respectively. Results The chloroform eluting parts had the inhibitory action on the growth of ovarian cancer cell lines OVCAR-3 cultured in vitro. Inhibitory ratios of high and low dose group were 20.6% and 11.4% respectively. The chloroform eluting parts could inhance the apoptosis of OVCAR3 in morphological method and flow cytometry methods. Conclusion The chloroform eluting parts from Acanthopanax giraldii Harms has the effect to promote the apoptosis of cancer cell lines OVCAR3.
[Key words] Acanthopanax giraldii Harms; Apoptosis; OVCAR3; Ovarian cancer
红毛五加为五加科植物，以茎皮入药，性温、味辛、入肝肾经。具有祛风除湿，通关节、强筋骨之功效，主治风寒湿痹、足膝无力等症，现代药理试验证明红毛五加多糖对体外培养胃癌细胞抑制作用，能通过抑制原癌基因，激活抑癌基因和细胞因子，从而诱导胃癌细胞凋亡[3]，在抗肿瘤的同时对健康人细胞无影响[4]。红毛五加茎皮挥发油成分对体外培养人白血病粒细胞有明显抑制癌细胞生长效应，抑制率达90%[5]。COX-2在肿瘤的发生发展过程中有重要作用，COX-2 通过旁分泌和自分泌直接地或通过上调芳香族酶的活性间接地促进肿瘤细胞的生长[6-8]。在前期的实验中，笔者提取分离的红毛五加正丁醇萃取部分经氯仿洗脱部分能通过抑制COX-2，从而抑制炎症因子PGE2产生，具有抑制炎症反应的作用。在此文中，笔者以人卵巢上皮癌细胞 OVCAR3为模型细胞研究此部分提取分离物是否也具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
[8]Costa C，Soares R，Reis-Filho JS，et al. Cyclo-oxygenase 2 expression is associated with angiogenesis and lymph node metastasis in human breast cancer[J].J Clin Pathol，2002，55（6）：429-434.
[9]Shigemasa K，Tian X，Gu L，et al. Expression of cyclooxygenase-2 and its relationship to p53 accumulation in ovarian adenocarcinomas[J]. Int J Oncol，2003，22（1）：99-105.
[10]Landen CN Jr，Mathur SP，Richardson MS，et al. Expression of cyclooxygenase-2 in cervical，endometrial，and ovarian malignancies[J]. Am J Obstet Gy
[11]Li S，Miner K，Fannin R，et al. Cyclooxygenase-1 and 2 in normal and malignant human ovarian epithelium[J]. Gynecol Oncol，2004，92（2）：622-627.
[12]Denkert C，Kobel M，Pest S，et al. Expression of cyclooxygenase 2 is an independent prognostic factor in human ovarian carcinoma[J]. Am J Pathol，2002，160（3）：893-903.
[13]Creminon C，Habib A，Maclouf J，et al. Differential measurement of constitutive （COX-1） and inducible （COX-2） cyclooxygenase expression in human umbilical vein endothelial cells using specific immunometric enzyme immunoassays[J]. Biochim Biophys Acta，1995，1254（3）：341-348.
[14]Marx J. Cancer research Anti-inflammatories inhibit cancer growth--but how[J]. Science，2001，291（5504）：581-582.
[15]Mertz PM，DeWitt DL，Stetler-Stevenson WG，et al. Interleukin 10 suppression of monocyte prostaglandin H synthase-2. Mechani of inhibition of prostaglandin-dependent matrix metalloproteinase production[J]. J Biol Chem，1994，269（33）：21322-21329.
（收稿日期：2012-06-05本文编辑：林利利）
[关键词] 红毛五加；凋亡；OVCAR3；卵巢癌
[] A[文章编号] 1674-4721（2012）07（c）-0010-03
Apoptosis of ovarian cancer cell lines OVCAR-3 induced by the extract Acanthopanax giraldii Harms
OUYANG Zizhang1 LONG Qicai2
1. The People′s Hospital of Qingyuan City in Guangdong Province, Qingyuan 511518, China; 2. College of Pharmacy, Sun Yat-sun University, Guangdong Province, Guangzhou 510006, China
[Abstract] Objective To investigate the anti-tumor activity of extract from Acanthopanax giraldii Harms. Methods Growth inhibition and promote apoptosis of cancer cell lines OVCAR3 by the chloroform eluting parts were measured by MTT method, morphological method and flow cytometry methods respectively. Results The chloroform eluting parts had the inhibitory action on the growth of ovarian cancer cell lines OVCAR-3 cultured in vitro. Inhibitory ratios of high and low dose group were 20.6% and 11.4% respectively. The chloroform eluting parts could inhance the apoptosis of OVCAR3 in morphological method and flow cytometry methods. Conclusion The chloroform eluting parts from Acanthopanax giraldii Harms has the effect to promote the apoptosis of cancer cell lines OVCAR3.
[Key words] Acanthopanax giraldii Harms; Apoptosis; OVCAR3; Ovarian cancer
红毛五加为五加科植物，以茎皮入药，性温、味辛、入肝肾经。具有祛风除湿，通关节、强筋骨之功效，主治风寒湿痹、足膝无力等症，现代药理试验证明红毛五加多糖对体外培养胃癌细胞抑制作用，能通过抑制原癌基因，激活抑癌基因和细胞因子，从而诱导胃癌细胞凋亡[3]，在抗肿瘤的同时对健康人细胞无影响[4]。红毛五加茎皮挥发油成分对体外培养人白血病粒细胞有明显抑制癌细胞生长效应，抑制率达90%[5]。COX-2在肿瘤的发生发展过程中有重要作用，COX-2 通过旁分泌和自分泌直接地或通过上调芳香族酶的活性间接地促进肿瘤细胞的生长[6-8]。在前期的实验中，笔者提取分离的红毛五加正丁醇萃取部分经氯仿洗脱部分能通过抑制COX-2，从而抑制炎症因子PGE2产生，具有抑制炎症反应的作用。在此文中，笔者以人卵巢上皮癌细胞 OVCAR3为模型细胞研究此部分提取分离物是否也具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料
红毛五加由中山大学药学院杨得坡教授鉴定为红毛五加（Acanthopanax giraldii Harms.）的茎皮；红毛五加提取物为红毛五加正丁醇萃取部分经氯仿洗脱部分；人卵巢上皮癌细胞OVCAR3（中山大学实验动物中心细胞库）；DMEM培养基（美国Gibco公司，批号：1380549）；胎牛血清（杭州四季青公司，批号：080919）；Hoechst33258（美国Sigma公司，批号为：CE294011）；碘化嘧啶PI（美国Sigma公司，批号：247208120）；MTT（碧云天生物技术研究所，批号：080721）；塞来昔布（美国辉瑞公司，批号：639T）；实验中所用甲醇、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、乙醇等试剂均为分析纯；CO2培养箱（德国 HERAEUS公司）；超净工作台（HEAL FORCE公司）；DMI4000B倒置显微镜（德国Leica公司）；Thermo 多功能酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）；流式细胞仪（美国 BD FACS Calibur）。1.2 试验方法
1.2.1 MTT法检摘自：毕业论文摘要www.udooo.com
测纯氯仿洗脱组分对OVCAR3细胞生长抑制作用取对数生长期OVCAR3细胞，以每孔103个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积为200 μL，将培养板放入CO2孵箱，在37℃，5%CO2以及饱和条件下，培养24 h，吸弃培养液，每孔加入180 μL培养基，随即按照试验分组加入20μL试验药物，对照组加入20 μL培养基，使药物达到相应的药物浓度，孵育48 h，每孔加入MTT溶液（5 mg/L）20 μL，37℃继续孵育4 h，小心吸弃孔内培养上清液，PBS洗涤3次，每孔加入150 mL DMSO，振荡10 min，使甲臜充分溶解，选择490 nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，记录结果。源于：论文标准格式范文www.udooo.com
[7]Leahy KM，Ornberg RL，Wang Y，et al. Cyclooxygenase-2 inhibition by celecoxib reduces proliferation and induces apoptosis in angiogenic endothelial cells in vivo[J]. Cancer Res，2002，62（3）：625-631.[8]Costa C，Soares R，Reis-Filho JS，et al. Cyclo-oxygenase 2 expression is associated with angiogenesis and lymph node metastasis in human breast cancer[J].J Clin Pathol，2002，55（6）：429-434.
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[10]Landen CN Jr，Mathur SP，Richardson MS，et al. Expression of cyclooxygenase-2 in cervical，endometrial，and ovarian malignancies[J]. Am J Obstet Gy
源于：论文格式范例www.udooo.com
necol，2003，188（5）：1174-1176.[11]Li S，Miner K，Fannin R，et al. Cyclooxygenase-1 and 2 in normal and malignant human ovarian epithelium[J]. Gynecol Oncol，2004，92（2）：622-627.
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（收稿日期：2012-06-05本文编辑：林利利）