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摘要：目的：γ-谷氨酰水解酶(GGH)是甲氨蝶呤(MTX)聚谷氨酸化的一种关键酶,是一种溶酶体酶,通过裂解MTX多聚谷氨酸盐(MTXPGs)的谷氨酸残基使MTX重新流出细胞,以而使MTX在细胞内的作用减弱,高水平的GGH与MTX的耐药有关。本实验通过探讨GGH基因全编码区单核苷酸多态性(cSNPs)在急性白血病(AL)患儿和正常儿童中的分布情况,并以期发现新的多态性位点,浅析各基因型在两组之间的分布差别。策略：以92例AL患儿的骨髓和124例正常儿童的外周血中提取总RNA,逆转录制备cDNA。采取RT-PCR-变性梯度凝胶电泳(RT-PCR-DGGE)结合DNA直接测序技术对以上cDNA标本进行GGH基因cSNPs及基因突变的筛查与鉴定。结果：首次在中国汉族儿童中鉴定了GGH基因4个国外已筛查到的cSNPs,即T16C(Cys6Arg)、G91A (Ala31Thr)、A268G (He90Val)和52T (Thrl51He),并确定了AL患儿和正常儿童中GGH各cSNP位点的等位基因频率和基因型分布特点在AL组及正常儿童组中,GGH452位点T等位基因频率分别为8.7%和10.1%,16位点C等位基因频率分别为20%和17.1%,91位点A等位基因频率分别为20%和16.7%,268位点G等位基因频率分别为1.1%和0.8%。这些cSNPs在两组人群的等位基因频率及基因型频率的差别无统计学作用,表明这些多态性与白血病的易感性无相关性。此外发现中国汉族儿童与日本、非裔-美洲及墨西哥人群的GGH452位点T等位基因频率差别均具有统计学作用(P0.05)。并发现两个新的错义突变：在正常对照组中发现GGH的第2外显子191位点有着T→G碱基替代,导致第64位氨基酸由亮氨酸(Leu)被色氨酸(Trp)替代；在白血病患儿中发现GGH基因第8外显子779位点有着A→G碱基替代,即第260位氨基酸由组氨酸(His)变为精氨酸(Arg),产生另一新的错义突变杂合子。结论：在中国汉族人群中利用PCR-DGGE结合DNA直接测序技术对GGH基因进行大规模cSNPs筛查,发现4个国外已报道到的cSNPs,即T16C (Cys6Arg)、G91A(Ala31Thr)、A268G (Ile90Val)、52T (Thrl51He),并初步确定了中国AL患儿和正常儿童中GGH各SNP位点的等位基因频率和基因型分布特点；在国内用统计学策略证实不同种族人群GGH52Tl的等位基因频率有着显著差别,说明GGH 52T基因多态性有着种族差别性,提示MTX药效在种族间也可能有着较大差别；在GGH中发现2个新的错义突变,即T191G (Leu64Trp)和A779G (His60Arg),为国际首次报道。关键词：γ-谷氨酰水解酶基因论文单核苷酸多态性论文变性梯度凝胶电泳论文急性白血病论文
英文縮略词表4-6
中文摘要6-8
Abstract8-10
前言10-12
材料与策略12-20
结果20-32
讨论32-38
结论38-39