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摘要：目的本探讨通过毒理学实验和辅助降血脂实验,探讨牛蒡茶的安全性和降血脂作用,为拓展牛蒡在功能性食品、保健品、药品等相关领域的运用提供科学依据。策略1毒理学实验(1)小鼠急性毒性试验选择20只小鼠,雌雄各半,体重18.2～21.6g,每只小鼠按0.2ml/10g.bw,每天灌胃2次,给予剂量为20.0g/kg.bw,染毒2周后,观察小鼠的中毒症状,记录小鼠死亡数量。(2)遗传毒性实验①沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)依据毒性试验结果,实验设立8组：五个剂量组(8、40、200、1000、5000μg/皿),自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组。在加S-9与不加S-9混合液的条件下,运用平板掺入法进行试验。大鼠肝匀浆制备的S-9混合液经多氯联苯诱导后作为本实验的体外活化系统。实验运用的菌株为鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102,经鉴定后符合要求。每个实验组分别设立3个平皿。判断阳性结果的要求为受试物的回变菌落数是自发回变菌落数的2倍以上,并且有着剂量—反应联系。相同条件下,重复本实验两次。②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验50只小鼠,雌雄各半,按体重(25-30g)大小随机分成5组,每组10只,分别为蒸馏水阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组(40mg/kg.bw)、低剂量组(2.5g/kg.bw)、中剂量组(5g/kg.bw)、高剂量组(10.0g/kg.bw)。(?)灌胃量按0.2ml/10g.bw,两次染毒时间相隔24h。第二次染毒后,6h后麻醉处死小鼠剥取股骨,制作玻片,镜下观察每只小鼠1000个嗜多染红细胞(PCE),计数微核细胞数,通过微核细胞数/嗜多染红细胞数得出微核率,以千分率表示。与此同时,镜下观察200个PCE,计数正染红细胞(NCE)数量,计算二者比值(PCE/NCE)。③小鼠精子畸形实验雄性小鼠25只,体重25-30g,按照体重大小随机分成5组,每组5只。实验策略同上②。组别分别为蒸馏水阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组(40mg/kg.bw)、低剂量组(2.5g/kg.bw)、中剂量组(5g/kg.bw)、高剂量组(10.0g/kg.bw)。灌胃1次/d,持续5d,35d后麻醉脱臼处死小鼠,剥离双侧附睾,制作玻片镜检。计数1000个结构完整的精子的畸变类型和数量,以百分率表示精子畸形率。(3)大鼠30d喂养实验选择体重74～94g断乳大鼠80只,雌雄各半,按照体重大小随机分为4组。阴性对照组和3个剂量组。剂量组相当于人体推荐量的25、50、100倍,分别为3.75,7.50.15.00g/kg.bw。阴性对照组,灌胃等体积蒸馏水。单笼喂养,自由饮食,30d后,禁食不禁水16h,抽取腹动脉血,测定血生化指标并检查内脏病理情况。2辅助降血脂实验雄性断乳大鼠40只,体重74～94g,根据血脂水平随机分为4组,每组10只,分别为高脂对照组、低、中、高剂量实验组。高脂对照组饲高脂饲料同时灌胃蒸馏水；低、中、高剂量实验组饲高脂饲料同时灌胃不同剂量的受试物。连续观察31天后,取尾血测定各项血脂指标。结果1毒理学实验(1)急性毒性实验实验期间,小鼠未出现中毒症状及死亡情况,同时受试样品对雄性及雌性小鼠的MTD均高于20.0g/kg·bw。依据急性毒性分级标准,表明样品的急性毒性级别为无毒级。(2)遗传毒性实验①Ames试验两次实验观察到各剂量组回变菌落数均未达到自发回变菌落数的2倍,不有着剂量—反应联系,结果为阴性。在添加和不添加S-9的条件下,未导致四株实验鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102菌株出现遗传毒性。②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验与阴性对照组比较,各剂量组微核率没有统计学作用(P0.05),环磷酰胺阳性对照组有统计学差别(P0.01),表明该样品对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核没有致突变作用。③小鼠精子畸形实验与阴性对照组比较,各剂量组小鼠精子畸形率无统计学作用(P0.05),而环磷酰胺阳性对照组有统计学差别(P0.01)。表明受试物对小鼠精子没有致畸作用。(3)大鼠30d喂养实验在实验历程中,通过观察各组小鼠生长情况良好,体重增量、食物利用率、血常规及血生化各指标、脏器重量和脏器系数等各项指标与对照组比较均无统计学差别(P0.05)且均在正常值范围。各实验组没有出现中毒体征及死亡情况。2辅助降血脂实验实验期内,各组动物生长活动正常,体重差别无统计学作用(P0.05)。与高脂对照组比较,实验低、中、高剂量组大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)均低于高脂对照组(P0.05或P0.01)；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均高于高脂模型(P0.05),血清TC分别下降0.32%、15.3%、21.4%,血清TG分别下降5.9%、22.6%、32.4%,血清HDL-C分别上升0.02mmol/L、.24mmol/L、0.32mmol/L。结论1、在急性毒性实验历程中,未见小鼠出现中毒症状及死亡情况,同时牛蒡茶样品对雄性及雌性小鼠的MTD均高于20.0g/kg·bw。依据急性毒性分级标准,表明样品的急性毒性级别为无毒级。2、通过Ames试验,微核试验和精子畸形试验三次遗传毒性试验,结果均为阴性,提示牛蒡茶在试验条件下未显示有遗传毒性。3、30d喂养试验结果,牛蒡茶对大鼠各观察指标未产生显著的毒性作用,在推荐量范围内用牛蒡茶是安全的。4、不同剂量的牛蒡茶,均能降低大鼠的TC、TG水平和升高大鼠的HDL-C水平。根据《保健食品检验与评价技术规范》判定标准,可以说明牛蒡茶有辅助降血脂作用。关键词：牛蒡茶论文急性毒性论文降血脂论文
中文摘要6-10
ABSTRACT10-15
符号说明15-16
前言16-19
第一部分 毒理学实验19-32
1 材料与策略19-21
2 结果21-31
3 讨论31-32
第二部分 辅助降血脂功能实验32-37
1 材料与策略32-34
2 结果34-35
3 讨论35-37
小结37-38
附录38-60