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试谈块菌攀枝花块菌多糖提取、纯化与抗氧化活性

收藏本文 2024-02-13 点赞:20036 浏览:85358 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:块菌作为一种稀有食用真菌,具有丰富的营养和优越的保健功能。本探讨选用中国”块菌之乡”攀枝花出产的块菌,采取现代提取、分离技术提取块菌中的多糖,采取木瓜蛋白酶和大孔树脂AB-8对所得粗多糖中的杂质蛋白质、色素进行纯化分离,探讨了攀枝花块菌多糖的体外抗氧化性能,主要探讨内容和结论如下:1.系统比较了四种不同类型的策略提取块菌中多糖,在单因素试验的基础上,利用Box-Benhnken中心组合试验,以多糖提取率和多糖含量同为响应值对四种提取策略进行工艺条件的响应面优化。结果表明:传统热水浸提法的最佳工艺参数为提取温度为90℃、提取时间为60min、料液比为33:1,在该条件下多糖论述提取率为13.45%,论述含量为70.75%,验证得实际提取率为13.32%,实际含量71.55%;酶法辅助提取法的最佳工艺条件为酶解时间65min、酶解温度61℃、酶用量1.6%、pH为5.6,多糖论述提取率为15.00%,论述含量为74.19%,实际提取率为14.31%,实际含量74.96%;超声波辅助提取法的最佳工艺条件为超声波时间36min、超声波温度50℃、液料比40:1、超声波功率140W,多糖的论述提取率为18.42%,实际提取率为18.15%,论述含量为74.70%,实际含量71.04%;超声波协同酶法提取的最优工艺条件为超声波功率140W、超声波时间27min、pH值6.4、酶解时间20min,多糖的论述提取率为21.11%,实际提取率为20.91%;论述含量为71.93%,实际含量72.70%。超声波协同酶法的多糖提取率比单独利用生物酶或者超声波都高,是热水浸提的1.6倍。由此,超声波协同酶法提取块菌多糖效果最佳。2.通过比较TCA法、Sevage法、酶结合Sevage法三种策略的脱蛋白效果,以蛋白脱除率和多糖回收率为指标,得到最佳脱蛋白策略是酶结合Sevage法。在单因素试验的基础上进行响应面优化,其最佳的脱蛋白条件为酶解时间2h、氯仿:正丁醇(v/v)为5.6:1、振摇时间20min,蛋白脱除率为73.16%,多糖回收率为85.47%。3.选用AB-8、X-5、D101三种大孔树脂和活性炭、硅藻土、活性炭+硅藻土、高岭土、双氧水共八种不同的处理进行脱色试验,通过比较脱色率和多糖回收率最后选取AB-8大孔树脂吸附进行脱色试验。在单因素试验的基础上进行响应面优化,得到最优工艺条件为脱色温度40℃、摇床转速170r/min、脱色时间5h,脱色率为76.02%,多糖回收率为84.23%。4.块菌粗多糖TIP脱蛋白和脱色处理后透析除杂和超滤离心,得到块菌多糖TIP-Ⅲ(分子质量100KD)、TIP-Ⅱ (100KD分子质量50KD)、TIP-Ⅰ(分子质量50KD)。5.通过五种不同的系统(总还原能力、羟自由基·OH, DPPH·、超氧阴离子O2-·、螯合金属离子)探讨了块菌粗多糖及其不同组分的抗氧化性能。结果表明块菌多糖具有较强的抗氧化能力,其能力的大小与多糖质量浓度有着正相关性;清除自由基的能力依次为TIP-ⅢTIP-ⅡTIP-ⅠTIP,表明大分子质量的块菌多糖的抗氧化活性强于低分子质量的块菌多糖。关键词:块菌多糖论文提取论文脱蛋白论文脱色论文抗氧化论文

    摘要4-6

    Abstract6-12

    第一章 绪论12-28

    1 块菌概述12-14

    1.1 块菌介绍12

    1.2 块菌的探讨概况12-14

    1.2.1 块菌人工栽培技术探讨12

    1.2.2 块菌的营养价值探讨12-13

    1.2.3 块菌的芳香性成分探讨13

    1.2.4 块菌的分子生物学探讨13-14

    2 多糖概述14-26

    2.1 多糖的定义及分类14-16

    2.1.1 多糖的定义14

    2.1.2 多糖的分类14-15

    2.1.3 块菌多糖15-16

    2.2 多糖探讨的常用策略16-22

    2.2.1 多糖的提取16-18

    2.2.2 多糖的纯化18-20

    2.2.3 多糖的分级20-22

    2.3 多糖的生物活性探讨22-25

    2.3.1 多糖的免疫调节作用22-23

    2.3.2 多糖的抗病毒活性23

    2.3.3 多糖的抗肿瘤作用23-24

    2.3.4 多糖的抗氧化活性24-25

    2.3.5 其它的生物活性作用25

    2.4 多糖探讨的近况及展望25-26

    3 立题依据与探讨内容26-28

    3.1 立题依据与探讨作用26

    3.2 主要探讨内容26-28

    第二章 块菌多糖的提取工艺探讨28-70

    1 材料、试剂及仪器28-29

    1.1 材料28

    1.2 试剂28

    1.3 仪器与设备28-29

    2 实验策略29-34

    2.1 多糖的测定策略29

    2.1.1 葡萄糖标准曲线的绘制29

    2.1.2 多糖含量的测定29

    2.2 原料预处理29

    2.3 块菌多糖提取工艺流程29-30

    2.4 块菌多糖的传统热水浸提法工艺条件探讨30-31

    2.4.1 热水浸提法工艺条件单因素试验30

    2.4.2 Box-Behnken中心组合设计试验30-31

    2.5 块菌多糖的酶法辅助提取工艺条件探讨31-32

    2.5.1 酶法辅助提取工艺条件单因素试验31

    2.5.2 Box-Behnken中心组合设计试验31-32

    2.6 块菌多糖的超声波辅助提取工艺条件探讨32-33

    2.6.1 单因素试验32-33

    2.6.2 Box-Behnken中心组合设计试验33

    2.7 块菌多糖的超声波协同酶法提取工艺条件探讨33-34

    2.7.1 单因素试验33-34

    2.7.2 Box-Behnken中心组合设计试验34

    3 结果与浅析34-67

    3.1 多糖含量的测定34-35

    3.1.1 测定葡萄糖含量标准曲线35

    3.1.2 块菌多糖提取率及含量计算35

    3.2 热水浸提法提取块菌多糖的工艺探讨35-40

    3.2.1 提取时间的影响35-36

    3.2.2 提取温度的影响36

    3.2.3 液料比的影响36-37

    3.2.4 热水浸提法提取块菌多糖的工艺条件优化37-40

    3.2.5 热水浸提法提取块菌多糖的工艺条件验证试验40

    3.3 酶法辅助提取块菌多糖的工艺探讨40-50

    3.3.1 酶种类的筛选40-41

    3.3.2 酶解温度的影响41

    3.3.3 pH值的影响41-42

    3.3.4 酶解时间的影响42-43

    3.3.5 酶用量的影响43

    3.3.6 液料比的影响43-44

    3.3.7 酶法辅助提取块菌多糖的工艺条件优化44-49

    3.3.8 块菌多糖的酶法辅助提取工艺条件验证试验49-50

    3.4 超声波辅助提取块菌多糖的工艺探讨50-59

    3.4.1 超声波温度的影响50

    3.4.2 超声波功率的影响50-51

    3.4.3 超声波时间的影响51-52

    3.4.4 液料比的影响52

    3.4.5 超声波辅助提取块菌多糖的工艺条件优化52-59

    3.4.6 超声辅助提取块菌多糖的工艺条件验证试验59

    3.5 超声波协同酶法提取块菌多糖的工艺探讨59-67

    3.5.1 策略筛选59

    3.5.2 超声时间的影响59-60

    3.5.3 超声温度的影响60

    3.5.4 超声功率的影响60-61

    3.5.5 酶解时间的影响61-62

    3.5.6 酶解pH值的影响62

    3.5.7 酶解温度的影响62

    3.5.8 超声波协同酶法提取块菌多糖的工艺条件优化62-67

    3.5.9 超声波协同酶法提取块菌多糖的工艺条件验证试验67

    4 结论与讨论67-70

    第三章 块菌多糖的分离纯化工艺探讨70-90

    1 材料、试剂及仪器70

    1.1 材料70

    1.2 试剂70

    1.3 主要仪器与设备70

    2 试验策略70-74

    2.1 块菌多糖脱蛋白探讨70-72

    2.1.1 多糖中蛋白质含量的测定70-71

    2.1.2 不同的脱蛋白策略71

    2.1.3 块菌多糖脱蛋白工艺条件探讨71-72

    2.2 块菌多糖脱色探讨72-74

    2.2.1 块菌多糖中色素的测定72-73

    2.2.2 不同的脱色处理73

    2.2.3 块菌多糖脱色工艺条件探讨73-74

    2.3 块菌多糖透析除杂74

    2.4 块菌多糖超滤法分级74

    3 结果与浅析74-87

    3.1 块菌多糖的脱蛋白探讨74-81

    3.1.1 块菌多糖中蛋白质的测定结果75

    3.1.2 不同脱蛋白策略的比较75-76

    3.1.3 块菌多糖的酶+Sevage法脱蛋白工艺条件优化76-81

    3.1.4 块菌多糖脱蛋白工艺条件验证试验81

    3.2 块菌多糖的脱色探讨81-87

    3.2.1 不同脱色处理的比较81-82

    3.2.2 块菌多糖脱色工艺条件优化82-87

    3.2.3 块菌多糖脱色工艺条件验证试验87

    3.3 块菌多糖超滤分离的结果87

    4 结论与讨论87-90

    第四章 块菌多糖的体外抗氧化活性探讨90-99

    1 材料、试剂及仪器90

    1.1 材料90

    1.2 试剂90

    1.3 主要仪器90

    2 试验策略90-92

    2.1 块菌多糖总还原能力测定90

    2.2 清除有机自由基(DPPH·)活性的测定90-91

    2.3 清除羟自由基(·OH)能力的测定91

    2.4 清除超氧阴离子(O_2·)能力的测定91

    2.5 螯合金属离子能力的测定91-92

    3 结果与浅析92-97

    3.1 块菌多糖总还原能力的测定结果92

    3.2 对有机自由基(DPPH·)的清除作用92-94

    3.3 对羟自由基(·OH)的清除作用94-95

    3.4 对超氧阴离子(O_2~-·)的清除作用95-96

    3.5 螯合金属离子能力的测定结果96-97

    4 结论与讨论97-99

    结论与展望99-101

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