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摘要：背景随着蛋白质组学的进展,人们对蛋白组学的探讨已经深入到亚细胞水平,但是目前技术的分辨率对于全细胞蛋白质组学的浅析无法满足人们的要求,于是亚细胞蛋白质组学的提出是蛋白质组学进展的必定结果。亚细胞蛋白质组学不仅可以降低蛋白的复杂性,而且可以富集低丰度蛋白,提升低丰度蛋白的检出率,有利于人们深入认识生命本质。细胞核蛋白质组学是亚细胞蛋白质组学的一部分,提取获得纯净的细胞核蛋白有利于细胞核蛋白质组学的探讨。目的比较三种不同的真核细胞核蛋白提取策略制备的核蛋白运用于双向电泳的可行性及效率。策略1.分别运用Dounce匀浆器研磨法、试剂盒提取法和涡旋破膜法提取HeLa细胞核蛋白；2. Bradford法测定蛋白浓度；3. Western blot检测标志性胞浆蛋白和核蛋白；4.双向电泳后银染扫描图像,PDQuest8.0浅析图像。结果涡旋法获得核蛋白的历程所需时间最短；试剂盒和涡旋法能够较快速的获得相对较纯的核蛋白；Dounce匀浆法获得的核蛋白量较少同时掺杂较多的胞浆蛋白。三种策略所获得的核蛋白双向电泳后其蛋白图谱基本相似。结论三种提取策略制备的核蛋白都可用于蛋白组学探讨中的双向电泳浅析,但试剂盒和涡旋法较Dounce法提取核蛋白纯度及效率高,且涡旋法更快速、成本更低。关键词：核蛋白论文蛋白质组学论文双向电泳论文HeLa细胞论文
致谢4-5
中文摘要5-7
Abstract7-9
缩略词表9-10
目次10-12
1 引言12-18
2 材料策略18-36
2.1 实验材料与仪器18-19
2.1.1 细胞株18
2.1.2 试剂18
2.1.3 仪器18-19
2.2 实验策略19-36
2.2.1 细胞培养19-20
2.2.2 核蛋白提取20-22
2.2.3 超滤法纯化蛋白22-23
2.2.4 蛋白定量23
2.2.5 Western Blot23-28
2.2.6 双向凝胶电泳28-36
3 实验结果36-52
3.1 细胞破膜情况36-38
3.2 蛋白定量38
3.3 胞浆蛋白、核蛋白及细胞器蛋白鉴定38-42
3.3.1 胞浆蛋白鉴定38-39
3.3.2 核蛋白鉴定39-40
3.3.3 细胞器蛋白鉴定40-42
3.4 双向电泳结果42-52
3.4.1 向电泳(一向线性聚焦)42-44
3.4.2 双向电泳(一向非线性聚焦)44-47
3.4.3 双向电泳(蛋白样品除离子处理)47-52
4 讨论52-56