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MUC1靶向抗肿瘤载药纳米粒构建与其效应体外评估

收藏本文 2024-04-06 点赞:7102 浏览:22184 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:MUC1蛋白是一种存在于细胞膜表面的糖蛋白,在大多数腺癌细胞中过量表达’,是一个具有应用潜能的广谱肿瘤靶标分子。本课题能与MUC1蛋白特异性的核酸适配体(aptamer)作为靶向分子,以聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)为,构建了一种新型的具有MUC1靶向性的紫杉醇(PTX)纳米粒制剂,并检测了其基本特征。,以MUC1+的乳腺癌细胞MCF-7为实验组,MUC1-肝癌细胞HepG2为对照组,在体外初步检测了该纳米粒对MUC1+肿瘤细胞的靶向性及杀伤效率。主要研究工作如下:1.构建MUC1靶向载药纳米粒并测量其表征:超声乳化-溶剂挥发法制备包载紫杉醇的PLGA纳米粒,并用MUC1核酸适配体修饰纳米粒使其具有靶向性。激光粒度散射仪测定纳米粒的粒径,比色法测定载药纳米粒的包封率和连接效率,实验结果:MUC1靶向载药纳米粒粒径225.3±9.2 nm,药物包封率83.6±1.7%。2.检测肿瘤细胞对MUC1靶向纳米粒的摄入情况:流式细胞仪法证明MUC1核酸适配体共价键偶联到纳米粒表面后,对细胞的靶向性改变,在体外仍然可以特异性地MUC1+肿瘤细胞,并促进细胞摄入与其偶联的纳米粒。在激光共聚显微镜下观察到,被摄入的纳米粒分布在细胞质内。3.评估MUC1靶向载药纳米粒对肿瘤细胞的杀伤作用:用MTS法测定了不同形式的制剂(NP, PTX, NP-PTX, Apt-NP-PTX)对MUC1+细胞和MUC1-细胞的杀伤效率及IC50。实验结果,MUC1靶向载药纳米粒可提高(P0.01)紫杉醇对MUC1+MCF-7细胞的杀伤作用,与非靶向载药纳米粒比较,细胞的生存率由84.47±5.47%降至61.77±3.72%,IC50值为由4.10μg/ml降低至1.52μg/ml。本课题首次将MUC1核酸适配体应用于靶向给药系统,构建的MUC1靶向性载药纳米粒性质稳定,运载抗肿瘤药物的效率较高,在体外可以特异性地MUC1+肿瘤细胞,并提高细胞对抗肿瘤药物的摄入,增强药物的杀伤作用,降低IC50值。因为MUC1蛋白在多种腺癌细胞中过量表达,提示新型的靶向载药纳米粒在治疗多种MUC1+肿瘤领域具有应用潜能。关键词:MUC1黏蛋白论文肿瘤论文核酸适配体论文靶向给药系统论文

    摘要5-6

    Abstract6-8

    章 绪论8-19

    1. 肿瘤的靶向治疗8-9

    2. MUC1蛋白作为肿瘤治疗的靶标分子9-10

    3. 核酸适配体作为肿瘤治疗的靶向分子10-16

    4. 选题依据及研究16-17

    5. 研究策略和技术路线17-19

    5.1 拟解决的科学问题17

    5.2 研究策略17-18

    5.3 技术路线18-19

    章 MUC1靶向载药纳米粒的构建19-29

    背景19-20

    1. 与方法20-23

    1.1 实验20

    1.1.1 化学试剂和20

    1.1.2 主要仪器和设备20

    1.1.3 软件20

    1.2 实验方法20-23

    1.2.1 纳米粒的制备20-21

    1.2.2 偶联MUC1核酸适配体S2.221

    1.2.3 检验核酸适配体与纳米粒的偶联方式21

    1.2.4 核酸适配体偶联效率的测定21-22

    1.2.5 MUC1靶向纳米粒粒径的测定22

    1.2.6 各种缓冲溶液的配制22

    1.2.7 紫杉醇吸光值-浓度标准曲线的测定22

    1.2.8 载药纳米粒包封率的测定22-23

    1.2.9 MUC1靶向载药纳米粒的体外释放23

    2. 实验结果与讨论23-29

    2.1 MUC1靶向纳米粒的制备及基本表征23-25

    2.2 偶联MUC1核酸适配体25-26

    2.3 紫杉醇标准曲线的测定26-28

    2.4 紫杉醇的体外释放28-29

    章 MUC1靶向纳米粒对MUC1~+肿瘤细胞的选择性29-36

    背景29

    1. 实验和方法29-31

    1.1 实验29-30

    1.1.1 主要试剂和29-30

    1.1.2 细胞培养30

    1.1.3 主要仪器和设备30

    1.2 实验方法30-31

    1.2.1 MCF-7细胞和HepG2细胞培养30

    1.2.2 MUC1核酸适配体选择性细胞30-31

    1.2.3 激光共聚焦显微镜观察MCF-7细胞对载药纳米粒的摄取31

    1.2.4 肿瘤细胞对纳米粒的摄入31

    2. 实验结果与讨论31-36

    2.1 MUC1核酸适配体选择性细胞31-33

    2.2 载药MUC1-纳米粒体外选择性测定33-34

    2.3 激光共聚焦显微镜观察MCF-7细胞对载药纳米粒的摄取34-36

    章 MUC1靶向载药纳米粒在体外的选择性杀伤作用36-42

    背景36-37

    1. 实验和方法37-38

    1.1 实验37

    1.1.1 主要试剂和37

    1.1.2 主要仪器和设备37

    1.2 实验方法37-38

    1.2.2 载药MUC1-纳米粒体外杀伤实验37

    1.2.3 IC_(50)的测定37-38

    2. 实验结果与讨论38-42

    2.1 载药MUC1-纳米粒体外杀伤实验38-40

    2.2 IC_(50)的测定40-42

    第五章 讨论和42-44

    一 讨论42-43

    二.43-44

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