摘要：微藻是在显微镜下可见的、单细胞藻类，在水环境中经常以单细胞或聚集的形式有着。微藻在水生环境初级生产中扮演了十分重要的角色，在固定全球二氧化碳方面也起到了非常重要的作用。近年来，人们对海洋微藻的探讨主要集中于微型海洋微藻（直径2-20μm）。微型海洋微藻的商业价值与日俱增，除了在水产养殖中发挥重要作用外，还是十分重要的营养品，近来微型海洋微藻还作为生物柴油的来源。微型海洋微藻的分类鉴定是探讨其生物学和实际运用的基础，尤为重要。传统的微藻鉴定主要依据形态学和色素浅析。形态学描述仅适用于特点显著的藻类鉴定。由于微型海洋微藻形态受环境影响太大，对探讨者知识背景要求很高，且耗时长，难以满足野外大规模样品的快速鉴定和大量新分离微藻藻种资源保存的需求。同样地，生化成分鉴定策略也并不适用于所有微型海洋微藻，在微型海洋微藻中难以找到唯一的有代表性的色素或其他生理生化指标，且这些生化成分并不稳定，难以用这些化学成分鉴定微型海洋微藻，由此，需要用像分子标签系统学等新策略改善传统的鉴定策略。对于那些形体微小、地理差别显著、培养条件造成差别的藻类，分子标签系统学鉴定是一种行之有效的策略。DNA条形码技术（DNAbarcoding）是运用最为广泛最快速、有效的分子手段。该技术适用于来自不同生长环境的不同生长阶段的细胞。藻类中还没有通用的条形码，但已有许多推测可用的微藻的条形码基因。目前的探讨主要集中在扩增得到尽可能多的微型海洋微藻分子标签，并将其在数据库中与已知种的相关序列进行比较，通过相似度和系统发生联系对未知种进行鉴定。这些探讨主要集中在红藻，褐藻，硅藻和甲藻，在其他藻类中的探讨很少。本探讨以实验室培养的未知微拟球藻鉴定出发，通过形态学描述、生理生化指标和分子标签鉴定三种策略将其鉴定为N. oceanica LAMB0002，其中形态学描述包括光镜观察和透射电镜观察，生理生化指标包括脂肪酸和色素浅析，分子标签鉴定中利用了18S rRNA基因和rbcL基因。同时用该策略对实验室已知的四株微拟球藻进行鉴定，得到的结果与原信息一致，这充分验证了该鉴定策略能满足微拟球藻的准确鉴定。该策略中的形态学观察和生理生化指标浅析无法满足微拟球藻种间鉴定的要求，由此将该策略进行调整，去除了电镜观察和生理生化指标浅析，得到了仅用光学显微镜进行初步鉴定，再用分子系统学浅析鉴定的策略。用该策略成功地鉴定了两株未知藻株，结果表明这两株未知藻株分别为N. oceanica和N.gaditana。这更进一步证明了该策略能够满足微拟球藻快速准确的鉴定。鉴定中仅用了18S rRNA基因序列进行浅析系统学浅析就能将两株微拟球藻鉴定到种，由此，将该策略在进行简化运用于微型海洋微藻的鉴定。本探讨以微拟球藻出发得到了准确的鉴定策略，再将该策略进行调整运用于野外采集的微拟球藻快速准确鉴定上，最后再运用于微型海洋微藻的快速准确鉴定上。探讨结果表明该策略能实现对一些微型海洋微藻的快速准确鉴定。关键词：微型海洋微藻论文微拟球藻论文快速准确鉴定论文系统学浅析论文
摘要5-7
Abstract7-13
前言 微型海洋微藻的分类鉴定13-28
1 微型海洋微藻介绍13
2 微型海洋微藻的重要量13-14
3 微型海洋微藻的分离14-17
3.1 微吸管分离法15
3.2 稀释分离法15
3.3 平板分离法15-16
3.4 水滴分离法16-17
4 微型海洋微藻的鉴定17-25
4.1 依据形态学指标的鉴定17-20
4.2 依据生理生化指标的鉴定20-21
4.3 依据分子标签序列的鉴定21-24
4.4 不同鉴定策略的适用条件24-25
5 微拟球藻的探讨25-27
6 本论文探讨的目的和作用27-28
第一章 微拟球藻准确鉴定的策略探讨28-45
1 材料与策略28-34
1.1 藻种来源28-29
1.2 藻种培养29-30
1.3 藻种的分离纯化30
1.4 藻种鉴定30-34
2 结果34-43
2.1 生长曲线34-35
2.2 依据形态学指标的鉴定35-38
2.3 依据生理生化指标的鉴定38-40
2.4 依据分子标签序列的鉴定40-43
3 讨论43-45
第二章 快速鉴定策略在野外采集微拟球藻鉴定上的运用45-57
1 采集样品45-46
2 样品的分离纯化46-48
2.1 微吸管法分离单细胞46-47
2.2 稀释法分离单细胞47-48
2.3 平板法分离单细胞48
2.4 合并同站位48
3 样品的鉴定48-51
3.1 依据形态学指标的鉴定48-49
3.2 依据分子标签序列的鉴定49-51
4 结果51-56
4.1 样品的分离51-53
4.2 目的片段的扩增53
4.3 系统进化树的构建53-56
5 讨论56-57
第三章 快速准确鉴定策略在多种微型海洋微藻鉴定上的运用57-65
1 材料与策略57
1.1 藻种来源57
1.2 藻种的分离57
1.3 藻种的鉴定57
2 结果57-61
2.1 样品的分离57-58
2.2 样品的鉴定58-61
3 讨论61-65
第四章 总结与展望65-67
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