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【摘要】 目的：探讨参附注射液对自体血回输患者围术期体液免疫功能的影响。方法：择期行脊柱手术患者40例，将其随机分成对照组(C组)和参附注射液组(组)，每组20例。C组采用常规自体血回输法，组于术前3 d开始注射参附注射液50 ml，1次/d，连续3 d，术中于收集自体血前30 min，经5 min静脉输注参附注射液50 ml，并在回收血液的肝素盐水和洗涤盐水内加入参附注射液，每500 ml加入参附注射液25 ml。于麻醉诱导前(T0)、术后1 h(T1)、1 d(T2)及5 d(T3)时取静脉血样，采用ELISA法测定血清免疫球蛋白(IgG、IgM)的浓度；记录手术时间、术中出血量、回输血量。 结果：两组患者手术时间、术中出血量、回输血量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与T0时比较，对照组T1～T3时血清IgG和IgM浓度降低，组T 1、T2时血清IgG浓度降低(P<0.05)，T3时差异无统计学意义，T1～T3时血清IgM浓度差异无统计学意义(P>0.05)；与C组比较，组T2、T3时血清IgG浓度、T1～T3时血清IgM浓度升高(P<0.05)。结论：参附注射液可在一定程度上减轻自体血回输患者体液免疫抑制，改善体液免疫平衡状态。
【关键词】 参附注射液； 输血； 自体； 抗体生成
Effect of Shenfu Injection on Perioperative Humoral I
【Abstract】 Objective:To investigate the effect of Shenfu injection on humoral immune function in patients required for autologous blood tranusion. Method:Sixty ASAⅠ orⅡ patients undergoing elective spinal surgery were randomly divided into 2 groups (n=20 each):Shenfu group and control group.In Shenfu group， Shenfu injection 50 ml was infused intrenously over 5 min at 30 min before the autologous blood was collected. Shengfu injection was added to the heparinized saline and washing saline at the same time (25 ml) until the final concentration reached 0.005%. Shenfu injection was not given in control group. Venous blood samples were taken before anesthesia induction (T0) and at 1 h after operation (T1)， and on day 1 and 5 after operation (T2-T3) for measurement of serum IgG and IgM concentrations by ELISA. The operation time， intraoperative blood loss and amount of salvaged blood reinfused were recorded.Result:There was no significant difference in the operation time， intraoperative blood loss and amount of salvaged blood reinfused between the two groups (P>0.05). Compared with the baseline value at T0，serum IgG and IgM concentrations were significantly decreased at T1-T3 in control group and the serum IgG concentration was significantly decreased at T1，T2 in Shenfu group (P<0.05). The serum IgG concentration at T2，T3 and serum IgM concentration at T1-T3 were significantly increased in Shenfu group than in control group (P<0.05).Conclusion:Shenfu injection can reduce humoral immunosuppression to some extent and improve the balance of humoral immunity in patients required for autologous blood tranusion.
【Key words】 Shenfu injection； Blood tranusion; Autologous； Antibody formationFirst-author’s address: Zhongshan Hosptial Affiliated to Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Zhongshan 528400，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.201
1 资料与方法
1.1 一般资料 本研究已获本院医学委员会批准，患者均签署知情同意书。择期脊柱手术(经后路全椎板切除减压、椎弓根螺钉固定或椎间植骨融合术)40例，年龄18～64岁，体重指数14～20 kg/m2，ASA分级Ⅰ或Ⅱ级，预计术中出血量500～1000 ml，无免疫、血液及内分泌系统疾病，非肿瘤患者。采用随机数字表法，将患者随机分成2组：对照组(C组 )和参附组(组)，每组20例。
1.2 麻醉方法 患者入室后，开放外周静脉用于输液，常规监测ECG、HR、BP、SpO2，局麻下行左侧桡动脉穿刺，置入留置导管，连续监测动脉压。静脉注射异丙酚1.5 mg/kg、 3 μg/kg、阿曲库铵1.0 mg/kg麻醉诱导后，气管内插管，行机械通气，潮气量 8～10 ml/kg， HR 10～14次/min，维持PETCO2 35～45 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)。行右颈内静脉穿刺，用于监测CVP和进行补液。术中吸入七氟醚1%～4%，静脉输注异丙酚4～8 mg/kg、0.1～0.2 μg/(kg·min)维持麻醉，术中间断静脉注射阿曲库铵维持肌松。术中根据HR、动脉压、CVP调整输血及输液，维持收缩压80～100 mm Hg，尿量≥1 ml/(kg·h)。
1.3 血液回输方法 采用C22.2 NO.601.1全自动血液回收机(Medtronic公司，美国)回收血液。手术开始前用肝素盐水(肝素12 500 U加入到生理盐水500 ml)200 ml预充双腔管和过滤器。切皮时启动负压吸引回收出血，控制吸引压力100～150 mm Hg。根据出血量调节肝素盐水的滴速，使肝素盐水与回收血的容积比为1:5。血液经过滤后(过滤网眼直径为40 μm)进入贮血器，当贮血器内血液达到800 ml以上时，血液回收机自动将回收血液进行离心(转速5000 r/min)及盐水洗涤(每次使用250 ml)，同时将清洗液、抗凝剂、游离血红蛋白、细胞碎屑、脂肪滴等杂质分流到废液袋内，所得浓缩红细胞泵入储血袋内。C组采用上述常规自体血回输法，组于术前3 d开始注射参附注射液(雅安三九药业有限公司)50 ml，1次/d，连续3 d，术中于收集自体血前30 min，经5 min静脉输注参附注射液50 ml，并在回收血液的肝素盐水和洗涤盐水内加入参附注射液，每500 ml加入参附注射液25 ml；对照组给予等容量生理盐水。术中及术后使用止血药、输异体血者排除本研究。
1.4 观察指标 记录手术时间、术中出血量、回输血量。于麻醉诱导前(T0)、术后1 h(T1)、1 d(T2)及5 d(T3)时取静脉5 ml，采用ELISA法测定血清免疫球蛋白(IgG、IgM)的浓度，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.5 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件进行分析，计量资料以(x±s)表示，重复测量数据比较采用重复测量设计的方差分析，组间比较采用成组t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者一般情况和术中情况各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。
2.2 两组T0时血清IgG和IgM浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)；与T0时比较，C组T1～T3时血清IgG和IgM浓度降低，组T1、T2
本研究参照文献[5]及预试验结果，选择参附注射液的给药方法为：于术前3 d开始注射参附注射液50 ml，1次/d，连续3 d，术中于收集自体血前30 min，经5 min静脉输注参附注射液50 ml，并在回收血液的肝素盐水和洗涤盐水内加入参附注射液，每500 ml加入参附注射液25 ml。本研究结果显示：患者回输自体血后血清免疫球蛋水平明显降低，表明自体血回输后机体免疫系统正向调节受到抑制，负向调节加强，体液免疫受到抑制；应用参附注射液后可提高血清免疫球蛋白水平，表明参附注射液可在一定程度上减轻体液免疫抑制，改善体液免疫平衡状态。
淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3)是红细胞膜上一种糖蛋白分子。LFA-3能与T细胞CD2结合，激活T淋巴细胞的免疫功能，并间接增强B淋巴细胞的免疫功能[6]。IgG为五类免疫球蛋白中血清水平最高者，也是再次抗体应答中所产生的主要抗体类别，主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成。IgM占血清免疫球蛋白总量的5%～10%，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是初次体液免疫应答中最早出现的抗体，是机体抗感染的“先头部队”。自体血回输过程中，在收集和洗涤自体血时，由于红细胞与人工管道和回收装置的接触，血红蛋白氧化变性，形成高铁血红蛋白沉积于红细胞内，红细胞肿胀甚至破碎[7]。由于红细胞的破坏可刺激组织释放炎性介质、氧自由基等，在其作用下，各类免疫细胞结构发生改变，细胞膜上钙通道开放，导致大量钙离子内流，引起钙超载、三磷酸腺苷代谢障碍[8]，从而引起免疫功能的抑制。参附注射液具有良好的钙阻滞作用，可防止收集和洗涤自体血时红细胞钙超载，减轻红细胞损伤[9]。而且参附注射液是一种带负性电荷的生物碱，可以吸附于管道表面，具有去电荷作用，以防止管道对红细胞的破坏。同时，参附注射液还可抑制炎性介质的合成和释放，消除氧自由基，具有良好的抗氧化功能[10]，从而阻断炎性反应及氧自由基之间的恶性循环，可阻止Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶失活，因此，可以防止免疫球蛋白受到炎性反应及氧自由基的损伤。
综上所述，参附注射液对可在一定程度上减轻自体血回输患者体液免疫抑制，改善体液免疫平衡状态。
参考文献
甘慧，孙萍，王全立，等. 红细胞免疫研究的历史、现状和前景[J].国外医学：免疫学分册，2005，28(4)：227-229.
郭峰，张乐之，王海滨.红细胞在免疫治疗中的重要应用价值[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2000，7(2):1-2.
[3] 王素云，魏影非，杜惠兰， 等. 参附注射液配合西药治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效及对免疫功能的影响[J].中国中药杂志，2005，30(5):383-384.
[4] 王素云， 邓凯， 魏影非，等. 参附注射液配合西药治疗慢性再生障碍性贫血对红细胞免疫功能的影响[J].现代中西医结合杂志，2007，16(16):2190-2190.
[5] 周奇，梁力建，彭宝岗， 等. 参附注射液对普通外科患者术后组织修复及免疫功能的影响[J].广东医学，2006，27(10):1567-1568.
[6] Virella G，Rugeles M T，Hyman B，et a1.The interaction of CD2 with its LFA-3 ligand expressed by autologous erythrocyt
[7] Kirkpatrick U J，Adams R A， Lardi A，et al.Rheological properties and function of blood cells in stored bank blood and salvaged blood[J].Br J Haematol，1998，101(2):364-368.
[8] Test S T， Mitsuyoshi J.Activation of the alternative pathway of complement by calcium-loaded erythrocytes resulting from loss of membrane phospholipid asymmetry[J].J Lab Clin Med， 1997， 130(2): 169-182.
[9] Spain D A，Miller F B， Bergamim T M， et al.Quality assesent of intraoperative blood salvage and autotranusion[J].Am Surg， 1997，63(12):1059-1064.
[10] 钱有辉，高尚志，姚震，等.体外循环中丹参、别嘌呤醇、参附注射液的氧自由基清除作用[J].中华胸心血管外科杂志，1993，9(3):224-226.
(收稿日期：2012-06-02) (本文编辑：陈丹云)
【关键词】 参附注射液； 输血； 自体； 抗体生成
Effect of Shenfu Injection on Perioperative Humoral I
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mmune Function in Patients Required for Autologous Blood Tranusion/ZHANG Xiao-xin，WU Lun，PENG Xue-，et al.//Medical Innovation of China，2012，9(23):004-006【Abstract】 Objective:To investigate the effect of Shenfu injection on humoral immune function in patients required for autologous blood tranusion. Method:Sixty ASAⅠ orⅡ patients undergoing elective spinal surgery were randomly divided into 2 groups (n=20 each):Shenfu group and control group.In Shenfu group， Shenfu injection 50 ml was infused intrenously over 5 min at 30 min before the autologous blood was collected. Shengfu injection was added to the heparinized saline and washing saline at the same time (25 ml) until the final concentration reached 0.005%. Shenfu injection was not given in control group. Venous blood samples were taken before anesthesia induction (T0) and at 1 h after operation (T1)， and on day 1 and 5 after operation (T2-T3) for measurement of serum IgG and IgM concentrations by ELISA. The operation time， intraoperative blood loss and amount of salvaged blood reinfused were recorded.Result:There was no significant difference in the operation time， intraoperative blood loss and amount of salvaged blood reinfused between the two groups (P>0.05). Compared with the baseline value at T0，serum IgG and IgM concentrations were significantly decreased at T1-T3 in control group and the serum IgG concentration was significantly decreased at T1，T2 in Shenfu group (P<0.05). The serum IgG concentration at T2，T3 and serum IgM concentration at T1-T3 were significantly increased in Shenfu group than in control group (P<0.05).Conclusion:Shenfu injection can reduce humoral immunosuppression to some extent and improve the balance of humoral immunity in patients required for autologous blood tranusion.
【Key words】 Shenfu injection； Blood tranusion; Autologous； Antibody formationFirst-author’s address: Zhongshan Hosptial Affiliated to Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Zhongshan 528400，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.201
2.23.002
红细胞具有识别、黏附、杀伤抗原及清除免疫复合物的功能，参与机体免疫调控，并有完整的自我调控系统，是机体免疫系统中的一个子系统。采用自体血回输实施血液保护时，由于红细胞与人工管道和回收装置的接触，血红蛋白氧化变性，红胞肿胀破碎，同时伴随白细胞凋亡，产生白细胞碎片及可溶性抗原，影响机体免疫功能。研究表明，参附注射液可在一定程度上保护红细胞，改善自体血回输患者的免疫功能[3]。体液免疫指B细胞在T细胞辅助下，接受抗原刺激后形成效应B细胞和记忆细胞，效应B细胞产生的具有专一性的抗体与相应抗原特异性结合后完成的免疫反应，从而起到免疫调节作用[4]。因此，体液免疫在机体免疫反应中有十分重要的地位。本研究拟探讨参附注射液对自体血回输患者围术期体液免疫功能的影响。1 资料与方法
1.1 一般资料 本研究已获本院医学委员会批准，患者均签署知情同意书。择期脊柱手术(经后路全椎板切除减压、椎弓根螺钉固定或椎间植骨融合术)40例，年龄18～64岁，体重指数14～20 kg/m2，ASA分级Ⅰ或Ⅱ级，预计术中出血量500～1000 ml，无免疫、血液及内分泌系统疾病，非肿瘤患者。采用随机数字表法，将患者随机分成2组：对照组(C组 )和参附组(组)，每组20例。
1.2 麻醉方法 患者入室后，开放外周静脉用于输液，常规监测ECG、HR、BP、SpO2，局麻下行左侧桡动脉穿刺，置入留置导管，连续监测动脉压。静脉注射异丙酚1.5 mg/kg、 3 μg/kg、阿曲库铵1.0 mg/kg麻醉诱导后，气管内插管，行机械通气，潮气量 8～10 ml/kg， HR 10～14次/min，维持PETCO2 35～45 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)。行右颈内静脉穿刺，用于监测CVP和进行补液。术中吸入七氟醚1%～4%，静脉输注异丙酚4～8 mg/kg、0.1～0.2 μg/(kg·min)维持麻醉，术中间断静脉注射阿曲库铵维持肌松。术中根据HR、动脉压、CVP调整输血及输液，维持收缩压80～100 mm Hg，尿量≥1 ml/(kg·h)。
1.3 血液回输方法 采用C22.2 NO.601.1全自动血液回收机(Medtronic公司，美国)回收血液。手术开始前用肝素盐水(肝素12 500 U加入到生理盐水500 ml)200 ml预充双腔管和过滤器。切皮时启动负压吸引回收出血，控制吸引压力100～150 mm Hg。根据出血量调节肝素盐水的滴速，使肝素盐水与回收血的容积比为1:5。血液经过滤后(过滤网眼直径为40 μm)进入贮血器，当贮血器内血液达到800 ml以上时，血液回收机自动将回收血液进行离心(转速5000 r/min)及盐水洗涤(每次使用250 ml)，同时将清洗液、抗凝剂、游离血红蛋白、细胞碎屑、脂肪滴等杂质分流到废液袋内，所得浓缩红细胞泵入储血袋内。C组采用上述常规自体血回输法，组于术前3 d开始注射参附注射液(雅安三九药业有限公司)50 ml，1次/d，连续3 d，术中于收集自体血前30 min，经5 min静脉输注参附注射液50 ml，并在回收血液的肝素盐水和洗涤盐水内加入参附注射液，每500 ml加入参附注射液25 ml；对照组给予等容量生理盐水。术中及术后使用止血药、输异体血者排除本研究。
1.4 观察指标 记录手术时间、术中出血量、回输血量。于麻醉诱导前(T0)、术后1 h(T1)、1 d(T2)及5 d(T3)时取静脉5 ml，采用ELISA法测定血清免疫球蛋白(IgG、IgM)的浓度，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.5 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件进行分析，计量资料以(x±s)表示，重复测量数据比较采用重复测量设计的方差分析，组间比较采用成组t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者一般情况和术中情况各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。
2.2 两组T0时血清IgG和IgM浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)；与T0时比较，C组T1～T3时血清IgG和IgM浓度降低，组T1、T2
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时血清IgG浓度均降低(P<0.05)，T3时差异无统计学意义，T1～T3时血清IgM浓度差异无统计学意义(P>0.05)；与C组比较，组T2、T3时血清IgG浓度、T1～T3时血清IgM浓度升高(P<0.05)，见表2。
3 讨论本研究参照文献[5]及预试验结果，选择参附注射液的给药方法为：于术前3 d开始注射参附注射液50 ml，1次/d，连续3 d，术中于收集自体血前30 min，经5 min静脉输注参附注射液50 ml，并在回收血液的肝素盐水和洗涤盐水内加入参附注射液，每500 ml加入参附注射液25 ml。本研究结果显示：患者回输自体血后血清免疫球蛋水平明显降低，表明自体血回输后机体免疫系统正向调节受到抑制，负向调节加强，体液免疫受到抑制；应用参附注射液后可提高血清免疫球蛋白水平，表明参附注射液可在一定程度上减轻体液免疫抑制，改善体液免疫平衡状态。
淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3)是红细胞膜上一种糖蛋白分子。LFA-3能与T细胞CD2结合，激活T淋巴细胞的免疫功能，并间接增强B淋巴细胞的免疫功能[6]。IgG为五类免疫球蛋白中血清水平最高者，也是再次抗体应答中所产生的主要抗体类别，主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成。IgM占血清免疫球蛋白总量的5%～10%，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是初次体液免疫应答中最早出现的抗体，是机体抗感染的“先头部队”。自体血回输过程中，在收集和洗涤自体血时，由于红细胞与人工管道和回收装置的接触，血红蛋白氧化变性，形成高铁血红蛋白沉积于红细胞内，红细胞肿胀甚至破碎[7]。由于红细胞的破坏可刺激组织释放炎性介质、氧自由基等，在其作用下，各类免疫细胞结构发生改变，细胞膜上钙通道开放，导致大量钙离子内流，引起钙超载、三磷酸腺苷代谢障碍[8]，从而引起免疫功能的抑制。参附注射液具有良好的钙阻滞作用，可防止收集和洗涤自体血时红细胞钙超载，减轻红细胞损伤[9]。而且参附注射液是一种带负性电荷的生物碱，可以吸附于管道表面，具有去电荷作用，以防止管道对红细胞的破坏。同时，参附注射液还可抑制炎性介质的合成和释放，消除氧自由基，具有良好的抗氧化功能[10]，从而阻断炎性反应及氧自由基之间的恶性循环，可阻止Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶失活，因此，可以防止免疫球蛋白受到炎性反应及氧自由基的损伤。
综上所述，参附注射液对可在一定程度上减轻自体血回输患者体液免疫抑制，改善体液免疫平衡状态。
参考文献
甘慧，孙萍，王全立，等. 红细胞免疫研究的历史、现状和前景[J].国外医学：免疫学分册，2005，28(4)：227-229.
郭峰，张乐之，王海滨.红细胞在免疫治疗中的重要应用价值[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2000，7(2):1-2.
[3] 王素云，魏影非，杜惠兰， 等. 参附注射液配合西药治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效及对免疫功能的影响[J].中国中药杂志，2005，30(5):383-384.
[4] 王素云， 邓凯， 魏影非，等. 参附注射液配合西药治疗慢性再生障碍性贫血对红细胞免疫功能的影响[J].现代中西医结合杂志，2007，16(16):2190-2190.
[5] 周奇，梁力建，彭宝岗， 等. 参附注射液对普通外科患者术后组织修复及免疫功能的影响[J].广东医学，2006，27(10):1567-1568.
[6] Virella G，Rugeles M T，Hyman B，et a1.The interaction of CD2 with its LFA-3 ligand expressed by autologous erythrocyt
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es results in enhancement of B cell responses[J].Cell Immunolgy，1988，116(2):308-319.[7] Kirkpatrick U J，Adams R A， Lardi A，et al.Rheological properties and function of blood cells in stored bank blood and salvaged blood[J].Br J Haematol，1998，101(2):364-368.
[8] Test S T， Mitsuyoshi J.Activation of the alternative pathway of complement by calcium-loaded erythrocytes resulting from loss of membrane phospholipid asymmetry[J].J Lab Clin Med， 1997， 130(2): 169-182.
[9] Spain D A，Miller F B， Bergamim T M， et al.Quality assesent of intraoperative blood salvage and autotranusion[J].Am Surg， 1997，63(12):1059-1064.
[10] 钱有辉，高尚志，姚震，等.体外循环中丹参、别嘌呤醇、参附注射液的氧自由基清除作用[J].中华胸心血管外科杂志，1993，9(3):224-226.
(收稿日期：2012-06-02) (本文编辑：陈丹云)